DB37T 3817-2019 畜禽肌肉中脂肪酸成分含量测定 气相色谱法.doc

ICS 67.050 X 04       DB37 山东省地方标准 DB 37/T 3817—2019       畜禽肌肉中脂肪酸成分含量测定 气相色谱法 Determination of fatty acids composition in livestock and poultry muscle—Gas chromatographic method 2019 - 12 - 24发布 2020 - 01 - 24实施 山东省市场监督管理局   发布 DB37/T 3817—2019 前  言 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东春藤食品有限公司。 本标准主要起草人：王彦平、王继英、蔺海朝、朱荣生、王诚、张印、王怀中、郭建凤、赵雪艳、呼红梅、成建国、林松、武英、刘畅、唐伟静、谢晋唐、时冉冉、莫贞峰。 5 畜禽肌肉中脂肪酸成分含量测定　气相色谱法 1　 范围 本标准规定了畜禽肌肉中脂肪酸成分的快速测定方法。 本标准适用于畜禽肌肉中脂肪酸成分的快速测定。 本标准的检出限0.02 mg/mL，定量限为0.08 mg/mL。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 9695.19　肉与肉制品　取样方法 3　 原理 试样中脂肪酸经异辛烷提取后，与2 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液通过酯交换甲酯化生成脂肪酸甲酯，用硫酸氢钠中和剩余的氢氧化钾，生成的脂肪酸甲酯采用气相色谱柱分离测定，面积归一法定量。 4　 试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1　 19种脂肪酸甲酯标准品：纯度≥99.0 %。 4.2　 甲醇：色谱纯。 4.3　 异辛烷。 4.4　 氢氧化钾。 4.5　 硫酸氢钠。 4.6　 脂肪酸甲酯标准储备液（10 mg/mL）：准确称取100 mg脂肪酸甲酯标准品(4.1)，用甲醇（4.2）定容至10 mL，分装，-20 ℃以下保存，有效期6个月。 4.7　 脂肪酸甲酯标准系列工作液：分别准确量取10 mg/mL脂肪酸甲酯标准储备液（4.6）1 mL、2.5 mL、5 mL用甲醇（4.2）定容至10 mL，配制成1 mg/mL、2.5 mg/mL、5 mg/mL脂肪酸甲酯标准系列工作液。 4.8　 氢氧化钾-甲醇溶液（2 mol/L）：准确称取氢氧化钾（4.4）13.10 g，溶解于100 mL甲醇（4.2）中，可轻微加热，过滤，密封保存。 4.9　 微孔滤膜：0.45 μm有机系。 5　 仪器和设备 5.1　 高效气相色谱仪：配氢火焰检测器。 5.2　 恒温摇床：控温范围为室温～50 ℃，控温精度为≤±1 ℃。 5.3　 食品粉碎机。 5.4　 绞肉机。 5.5　 分析天平：感量0.000 1 g和0.001 g各1台。 5.6　 漩涡混匀器：转速不低于1 000 rpm。 5.7　 烘箱：控温范围不低于65 ℃，控温精度≤±1 ℃。 6　 样品 按GBT 9695.19中取样方法，采集有代表性的样品，去除筋膜，用绞肉机（5.4）绞碎，放入烘箱（5.7）中65 ℃烘干至恒重。烘干肉样用食品粉碎机（5.3）粉碎，装入自封塑料袋中做好标记，室温保存备用。 7　 测定步骤 7.1　 提取 称取烘干粉碎肉样0.3 g～0.5 g，置于15 mL具塞试管中，加入4 mL异辛烷（4.3），漩涡混匀器（5.6）震荡混匀30 s，置于37 ℃恒温摇床（5.2）中震荡过夜。 7.2　 甲酯化 加4 mL 2 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液（4.8）经涡旋（5.6）混匀30 s，进行快速甲酯化，静置30 min分层，然后向试管中加入1 g左右的硫酸氢钠（4.5）猛烈震荡中和剩余的氢氧化钾（4.8），放置至澄清。甲酯化的上清液用0.45 μm微孔滤膜（4.9）过滤后待测。 7.3　 气相色谱参考条件 色谱柱：聚乙二醇强极性固定相，柱长30 m，内径0.250 mm，膜厚0.25 μm或其它效果等同的色谱柱。 检测器：氢火焰离子检测器（FID）。 进样器温度220 ℃。 检测器温度280 ℃。 程序升温：50 ℃保持1 min。 阶升1：25 ℃/min升温至220 ℃，保持0 min。 阶升2：3 ℃/min升温至230 ℃，保持18 min。 运行35 min。 载气：氮气。 气体流速：氮气：30 mL/min；氢气：40 mL/min；空气：450 mL/min。 分流比：50﹕1。 进样体积：1 μL。 7.4　 测定 7.4.1　 标准系列工作溶液和试样溶液的测定 在仪器的最佳条件下，分别取脂肪酸甲酯标准系列工作液（4.7）和试样溶液（7.2）上机测定，19种脂肪酸甲酯标准溶液（4.7）的气相色谱图参见附录A。 7.4.2　 定量 以脂肪酸甲酯浓度为横坐标，脂肪酸甲酯标准系列工作液（4.7）的色谱峰面积（响应值）为纵坐标，绘制标准曲线，其相关系数不低于0.99。试样中待测物的响应值应在标准系列工作液测定的线性范围内（相差不超过30 %）。如果超出标准系列工作液测定范围，应将试样溶液用异辛烷（4.3）进一步稀释后，重新测定。 7.5　 实验数据处理 试样中脂肪酸成分定性分析以保留时间确定，某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比Xi按照式（1）计算，通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的百分数来计算给定组分i的含量： (1) 式中： Xi ——试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比，%； ASi ——试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积； FFAMEi-Fai ——脂肪酸甲酯i转化成脂肪酸的系数，参见附录B； ƩASi ——试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积之和。 结果保留3位有效数字。 8　 精密度 在重复条件下，获得两次独立测定值结果的绝对差值不大于这两个测定值的算数平均值的10 %。 A A 附　录　A （资料性附录） 脂肪酸甲酯标准溶液和某样品脂肪酸甲酯提取液色谱图 脂肪酸甲酯标准溶液和某样品脂肪酸甲酯提取液色谱图见图A.1、图A.2。 图A.1　 脂肪酸甲酯混合标准溶液分离色谱图 图A.2　 某样品脂肪酸甲酯提取液分离色谱图 B B 附　录　B （资料性附录） 脂肪酸甲酯和脂肪酸之间的转化系数 脂肪酸甲酯和脂肪酸之间的转化系数见表B.1。 表B.1　 脂肪酸甲酯和脂肪酸之间的转化系数 序号 脂肪酸甲酯 脂肪酸简称 FFAME-FA CAS号 1 辛酸甲酯 C8:0 0.9114 111-11-5 2 葵酸甲酯 C10:0 0.9247 110-42-9 3 十二碳酸甲酯 C12:0 0.9346 111-82-0 4 十三碳酸甲酯 C13:0 0.9386 1731-88-0 5 十四碳酸甲酯 C14:0 0.9421 124-10-7 6 顺-9-十四碳一烯酸甲酯 C14:1n9c 0.9417 56219-06-8 7 十五碳酸甲酯 C15:0 0.9453 7132-64-1 8 十六碳酸甲酯 C16:0 0.9481 112-39-0 9 顺-9-十六碳一烯酸甲酯 C16:1n9c 0.9477 1120-25-8 10 十七碳酸甲酯 C17:0 0.9507 1731-92-6 11 十八碳酸甲酯 C18:0 0.9530 112-61-8 12 反-9-十八碳一烯酸甲酯 C18:1n9t 0.9527 1937-62-8 13 顺-9-十八碳一烯酸甲酯 C18:1n9c 0.9527 112-62-9 14 顺，顺-9，12-十八碳二烯酸甲酯 C18:2n6c 0.9524 112-63-0 15 二十碳酸甲酯 C20:0 0.9570 1120-28-1 16 顺-11-二十碳一烯酸甲酯 C20:1 0.9568 2390-09-2 17 顺，顺，顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯 C18:3n3 0.9520 301-00-8 18 二十二碳酸甲酯 C22:0 0.9604 929-77-1 19 顺-13-二十二碳一烯酸甲酯 C22:1n9 0.9602 1120-34-9 _________________________________