DB37T 3824.2-2019 青贮饲料质量检测与评价技术规范　第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定.doc

ICS 65.120 B 46       DB37 山东省地方标准 DB 37/T 3824.2—2019       青贮饲料质量检测与评价技术规范　第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定 Technical specification for silage quality testing and evaluation—Part2：Determination of absorbable starch in whole plant corn silage 2019 - 12 - 24发布 2020 - 01 - 24实施 山东省市场监督管理局   发布 DB37/T 3824.2—2019 前  言 DB37/T 3824—2019《青贮饲料质量检测与评价技术规范》分为4个部分： ——第1部分：全株玉米制作青贮饲料机械揉搓质量评价技术规范； ——第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定； ——第3部分：多功能饲草粉碎机作业质量技术规范； ——第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程。 本部分为DB37/T 3824—2019的第2部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本部分由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本部分由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本部分起草单位：山东省畜牧总站、山东五征高北农牧机械有限公司、德州农慧农牧专业合作联合社、东营市畜牧兽医工作站、山东芳华农业机械有限公司。 本部分起草人：翟桂玉、刘栋、姜慧新、王兆凤、张文娟、仲崇岳、曹阳、纪中良、王志坚、郭爱华、刘刚、张磊、王玉霞。 3 青贮饲料质量检测与评价技术规范　第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定 1　 范围 本标准规定了青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定方法。 本标准适用于所有青贮玉米可吸收淀粉含量的测定。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 728　禾本科牧草干草质量分级 NY/T 2129　饲草产品抽样技术规程 3　 术语与定义 下列术语与定义适用于本文件。 3.1　 可吸收淀粉　absorbable starch 健康动物胃肠中能够吸收的淀粉及其降解产物的总称。 4　 原理 样品经前处理后，先在沸水浴中经耐高温α-淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，离心，得上清液，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量（FS），沉淀加入一定浓度的氢氧化钾使之溶解，经葡萄糖淀粉酶作用将其转化成葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量(SS)，将获得的两个葡萄糖含量（FS+SS）相加，再乘以0.9即换算成可吸收淀粉含量。 5　 仪器设备 5.1　 离心机。 5.2　 电热恒温水浴锅。 5.3　 酸度计。 5.4　 分光光度计。 5.5　 电子分析天平（感量0.000 1 g）。 5.6　 容量瓶（100 mL、1 000 mL）。 6　 试剂与溶液 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 6.1　 乙醚。 6.2　 耐高温α-淀粉酶（120 000 U/mL）。 6.3　 2 mol/L氢氧化钾溶液。 6.4　 磷酸盐缓冲液（pH5.8），分别称取磷酸二氢钾8.34 g与磷酸氢二钾0.87 g，加适量水使其溶解，定容至1 000 mL。 6.5　 醋酸盐缓冲液(pH4.4)，分别量取0.2 mol/L醋酸溶液30.5 mL及0.2 mol/L醋酸钠溶液19.5 mL混匀。 6.6　 葡萄糖淀粉酶（100 000 U/mL）。 6.7　 2 mol/L盐酸溶液。 6.8　 葡萄糖试剂盒。 7　 检测方法 7.1　 样品前处理 7.1.1　 样品的干燥 抽取青贮玉米样品，并进行烘干处理，烘干样品过40目筛磨碎备用。 7.1.2　 样品脱脂 称取烘干磨碎样品2 g～5 g（精确到0.001 g），置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30 mL乙醚分三次洗去样品中脂肪，弃去乙醚。 7.2　 可吸收淀粉含量测定 7.2.1　 可吸收淀粉提取及转化 7.2.1.1　 上清液部分 取0.5 g试样放入50 mL离心管，加入10 mL(pH5.8)磷酸盐缓冲溶液和1 mL耐高温α-淀粉酶，沸水浴30 min，冷却至室温，离心(5 000 r/min，20 min)获得上清液；加入10 mL蒸馏水，洗涤沉淀，离心获得上清液(该步骤至少重复一次)。 7.2.1.2　 洗涤沉淀物部分 将7.2.1.1获得的洗涤离心沉淀物，加入6 mL 2 mol/L氢氧化钾溶解沉淀，室温下振荡30 min，促进沉淀溶解，以2 mol/L盐酸调pH至中性，加入5 mL醋酸盐缓冲液(pH4.4)和1 mL葡萄糖淀粉酶。60 ℃水浴45 min。离心(5 000 r/min，20 min)，收集上清液，再用10 mL蒸馏水洗涤沉淀(该步骤重复两次)，离心(5 000 r/min，20 min)，获得上清液。 7.2.2　 上清液的处理 7.2.2.1　 分别将7.2.1.1和7.2.1.2所收集的上清液，定容至100 mL容量瓶中。 7.2.2.2　 葡萄糖含量的测定。根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书，用分光光度计测定样品中葡萄糖的含量，以蒸馏水为空白管，以试剂盒自带标准液为标准管，把试剂与工作液按一定比例混合，置37 ℃水浴15 min，以空白管调零，在505 nm波长下读取各管吸光度值。 8　 测定结果计算 8.1　 计算公式 8.1.1　 葡萄糖（X）含量计算公式： (1) 式中： X ——葡萄糖含量，mg/L； A1——样品管吸光度； A2——标准管吸光度； C1——标准管中葡萄糖的浓度，mmol/L。 8.1.2　 可吸收淀粉（DS）含量计算公式： (2) 式中： DS——可吸收淀粉含量，%； C2 ——第一次处理上清液（FS）样品中葡萄糖的浓度，mg/L； C3 ——第二次处理上清液（SS）样品中葡萄糖的浓度，mg/L； V ——溶液终体积，L； W ——样品重量，mg。 8.2　 结果计算 同一试样取两个平行样测定，以其算术平均值作为测定结果，结果保留3位有效数字。 8.3　 允许差 三个平行样的测定结果最大允许相对标准偏差为5 %。 _________________________________