DB37T 3614-2019 混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的测定 高效液相色谱法.doc

ICS 65.120 B 46       DB37 山东省地方标准 DB 37/T 3614—2019       混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、 丁香酚和肉桂醛的测定　高效液相色谱法 2019 - 07 - 23发布 2019 - 08 - 23实施 山东省市场监督管理局   发布 DB37/T 3614—2019 目  次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂或材料 1 5 仪器设备 1 6 样品 2 7 试验步骤 2 7.1 提取 2 7.2 液相色谱参考条件 2 7.3 标准系列溶液 2 7.4 测定 2 8 试验数据处理 2 8.1 多点校准 2 8.2 单点校准 3 9 精密度 3 附　录　A （资料性附录） 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液的高效液相色谱图 4 前  言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省饲料质量检验所、青岛农业大学。 本标准主要起草人：张玮、李会荣、杨智国、李斌、莫贞峰、李俊玲、郝智慧、黄婷婷。 4 混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的测定 高效液相色谱法 1　 范围 本标准规定了混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的测定。 本方法在混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚检出限为25 mg/kg，定量限为50 mg/kg；肉桂醛的检出限为2.5 mg/kg，定量限为5.0 mg/kg。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195　动物饲料　试样的制备 3　 原理 试样中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛经甲醇提取、过膜后，供高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4　 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1　 水：GB/T 6682，一级。 4.2　 甲醇。 4.3　 乙腈：色谱纯。 4.4　 标准贮备溶液：精密称取百里香酚（CAS：89-83-8，纯度不低于98.0 %）、香芹酚（CAS：499-75-2，纯度不低于98.0 %）、丁香酚（CAS：97-53-0，纯度不低于98.0 %）和肉桂醛对照品（CAS：104-55-2，纯度不低于98.0 %）适量（精确至0.01 mg），分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇（色谱纯）溶解并稀释至刻度，混匀，配成浓度百里香酚、香芹酚、丁香酚为10 mg/mL、肉桂醛为1.0 mg/mL的标准贮备溶液。2 ℃～8 ℃密封保存，有效期为3个月。 4.5　 混合标准工作溶液：准确移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准贮备溶液（4.4）各1.0 mL 置于同一10 mL容量瓶中，用甲醇（色谱纯）稀释定容至刻度，混匀。该溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚的浓度为1.0 mg/mL、肉桂醛浓度为100 μg/mL。2 ℃～8 ℃密封保存，有效期为2周。 4.6　 微孔滤膜：0.45 μm，有机系。 5　 仪器设备 5.1　 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2　 电子天平：感量为0.1 mg和0.01 mg； 5.3　 涡旋振荡器。 6　 样品 按GB/T 20195制备试样，至少200 g，粉碎过0.42 mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7　 试验步骤 7.1　 提取 平行做两份实验。称取试样0.1～1 g（精确至0.1 mg），置于25 mL棕色容量瓶中，加入15 mL甲醇（4.2），振荡提取10 min，用甲醇（4.2）溶解定容至刻度，混匀。上清液过0.45 µm的微孔滤膜，供上机测定。 7.2　 液相色谱参考条件 色谱柱：C18柱， 长150 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm，或性能相当者。 柱温：30 ℃。 波长：280 nm。 流动相：乙腈（4.3）+水=42+58。 流速：1.0 mL/min。 进样量：20 μL。 7.3　 标准系列溶液 准确移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准工作溶液（4.5）适量，用甲醇（色谱纯）稀释成百里香酚、香芹酚、丁香酚浓度分别为1.00 μg/mL、5.00 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100 μg/mL、500 μg/mL，肉桂醛浓度分别为0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、5.00 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL的标准系列溶液，现用现配。 7.4　 测定 按照7.2给出的色谱参考条件，分别上机测定标准系列溶液和试样溶液。试样溶液与标准溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的保留时间相对偏差在±2.5 %之内，百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液图谱参见附录A。以百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的浓度为横坐标，以其响应值（峰面积）为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线相关系数不低于0.99。单点校准时，试样溶液与标准溶液中待测物的响应值相差不超过30 %。如超出线性范围，应用甲醇稀释（n倍）后，重新进样分析。 8　 试验数据处理 8.1　 多点校准 试样中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以质量分数ωi计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，多点校准按式(1)计算： (1) 式中： Ci ——从标准曲线查得的试样溶液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V ——提取液的定容体积，单位为毫升（mL）； m ——试样的质量，单位为克（g）； n ——稀释倍数。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 8.2　 单点校准 试样中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以质量分数ωi计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，单点校准按式(2)计算： (2) 式中： Ai ——试样溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛色谱峰面积； ASi——标准工作液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的峰面积； CSi——标准工作液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V ——试样提取液的定容体积，单位为毫升（mL）； m ——试样质量，单位为克（g）； n ——稀释倍数。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 9　 精密度 在重复性条件下两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10 %。 A A 附　录　A （资料性附录） 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液的高效液相色谱图 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液的高效液相色谱图见图A.1。 说明： 百里香酚、香芹酚、丁香酚浓度——5.0 μg/mL。 肉桂醛浓度——0.50 μg/mL。 图A.1　 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液色谱图 _________________________________