SNT 3039-2011 出口动物源性食品中安眠酮残留量的测定 高效液相色谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3039-2011出口动物源性食品中安眠酮残留量的测定高效液相色谱法Determination of methaqualone residues in animal original food forexport-High performance liquid chromatographic method2011-09-09发布2012-04-01实施中华人民共和国国家质量监肾检验检疫总局发布代数母防6了SN/T3039-2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国广东出人境检验检疫局负贲起草本标准主要起草人：吕飞、周宇、黄刚、曹维强、吴云普。SN/T3039一2011出口动物源性食品中安眠酮残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了出口动物源性食品中安眠酮残留量检验的制样和高效液相色谱测定方法。本标淮适用于猪肉、猪肝、猪肾和奶中安眠酮残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是挂日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试爸方法3方法提要试样中的安眠酮用二氯甲烷提取，提取液经浓缩、固相萃取柱净化店，用高效液相色谱仪检测。外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1乙腈：高效液相色谱纯。4.2甲醇：高效液相色谱纯。4.3丙酮：高效液相色谱纯。4.4正己烷：高效液相色谱纯。4.5二氯甲烷：高效液相色谱纯。4.6乙酸铵。4.7氢氧化钠。4.8无水硫酸钠：经650灼烧4h,置于干燥器内备用。4.9乙酸铵溶液(25mmol/L):准确称取乙酸铵1.925g,用水定容至1000mL。经0.45m水相滤膜过滤。4.10氢氧化钠(1mol/L):称取40g氢氧化钠溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。4.11氢氧化钠(0.1mol/L):称取4g氢氧化钠溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。4.12乙腈饱和正己烷：正己烷与足够的乙腈混合，至饱和。4.13洗脱液：乙腈+丙酮(5+5，体积比)，取50mL乙腈，加入50mL丙酮，混匀备用。4.14流动相：乙腈+25mmol/L乙酸胺(4+6，体积比)，取400mL乙腈，加人600mL25mmol/L乙酸胺(4.9)，超声混匀备用。4.15安眠酮标准品(methaqualone,C16H14N2O,相对分子质量250.29，CAS号：340-56-7)：纯度99.0%。1SN/T3039-20114.16安眠酮标准储备液：准确移取安眠酮标准品(4.15)1.00mL,浓度为10.00mg/L,用乙腈稀释并定容至10mL,浓度为1.00mg/L,05冰箱保存。根据需要再配成适用浓度的标准工作溶液。4.17固相萃取柱：60mg/3 mL HLB C18SPE,或其他等同效果的固相萃取柱。4.18有机相、水相针头滤膜：0.454m。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪带紫外可见波长检测器或二极管阵列检测器。5.2离心机：转速不低干4000r/min。5.3旋转蒸发仪。5.4分析天平：感量0.0001g。5.5涡旋振荡器。5.6匀浆机。5.7肉类组织粉碎机。5.8超声波水浴。5.9固相萃取装置。5.10离心管：50mL,5mL.6样品的制备和保存取样品去皮去筋约500g,用肉类组织粉碎机绞碎，装入沾净容器作为试样，密封，并标明标记。制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。试样置于一18以下保存，奶试样置于04以下保存。7提取和净化7.1提取7.1.1肌肉组织、肝脏、肾脏等称取5g(精确到0.01g)组织样品和10g无水硫酸钠(4.8)于50mL离心管中，加人1mL1mol/L氢氧化钠和20mL二氯甲烷提取液，均质提取1min,4000r/min离心5min,上清液经快速定性滤纸过滤到100mL浓缩瓶中，残渣用20mL二氯甲烷超声提取10min,4000r/min离心5min,合并二氯甲烷，40旋转蒸发至干。残留物(7.1.1)中加人1mL流动相(4.14)，充分涡旋振荡，转移至5mL离心管中，加人3mL乙腈饱和正已烷(4.12)，涡旋混匀，4000r/min离心5min,弃去上层正己烷层，原离心管中再加人3mL乙腈饱和正己烷，涡旋混匀，4000r/min离心5min,下层加0.1mol/L的氢氧化钠稀释至5mL作待净化液。7.1.2奶类等称取2g(精确到0.01g)试样于50mL离心管中，加入1mL1mol/L氢氧化钠和20mL二氯甲烷提取液，超声提取l0min,再振荡提取10min,4000r/min离心5min,上清液经快速定性滤纸过滤到100ml.浓缩瓶中，用二氯甲烷定容到20mL,移取5mL.滤液，加人5m【.水混匀后作待净化液.7.2净化用3mL甲醇、3mL0.1mol/L的氢氧化钠以1mL/min的流速淋洗活化萃取柱(4.17)，然后将待SN/T3039-2011净化液通过柱子（控制流速小于0.5mL/min),依次用3mL0.1mol/L的氢氧化钠、3mL甲醇以1mL/min的流速过柱淋洗，最后用5mL洗脱液(4.13)洗脱（控制流速小于0.5mL/min),收集洗脱液于25mL浓缩瓶中，40旋转蒸发至干，加1mL流动相(4.14)溶解残渣，溶液过0.454m有机相针头滤膜后进行高效液相色谱仪测定。8测定8.1色谱分离条件8.1.1色谱柱：Sunfire C18,54m,250mm4.6mm(内径)，或性能相当者。8.1.2测定波长：226nm。8.1.3流动相：乙腈-25mmol/L乙酸胺=40+60。8.1.4流速：1.0mL/min.8.1.5进样量：20L。8.1.6柱温：40。8.2色谱测定8.2.1样品测定取供色谱分析的样品溶液20L,注入高效液相色谱仪。根据样液中安眠酮含量的情况，选取响应值相近的标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中安眠酮含量的响应值均应在仪器的线性范围内，对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。与标准的保留时间比较定性，外标法定量。在上述的色谱条件下，安眠阴的参考保留时间约为13min。标准品色谱图参见图A.1。8.2.2空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。9结果计算和表述安眠酮含量结果按式(1)计算，计算结果需扣除空白值X=AXcXVt(1)A,m式中：X一样品中安眠酮残留量，单位为毫克每千克(mg/kg);A一样液中安眠酮的峰面积；c一标准工作液中安眠丽的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；V一最终样液的定容体积，单位为毫升(mL);A,一标准工作液中安眠爾的峰面积；m样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。10方法检测限、回收率和精密度10.1方法检测限在本方法中，安眠酮的检测限为10.04g/kg。3