SNT 2497.27-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第27部分：流式细胞术检测凋亡.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：流式细胞术检测凋亡犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊犘 犪 狉 狋 ：犜 犺 犲狌 狊 犪 犵 犲狅 犳 犳 犾 狅 狑犮 狔 狋 狅 犿 犲 狋 狉 狔 犻 狀犪 狆 狅 狆 狋 狅 狊 犻 狊 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分：第部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（）试验；第部分：空斑形成细胞（）试验；第部分：大型溞繁殖试验；第部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第部分：睾丸细胞 试验；第部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第部分：小鼠耳肿胀试验；第部分：腘窝淋巴结试验；第部分：血清溶血素测定试验；第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验；第 部分：种系突变试验；第 部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第 部分：荧光原位杂交试验；第 部分：聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第 部分：实验；第 部分：实验；第 部分：哺乳动物行为毒理学试验；第 部分：加合物的检测方法；第 部分：实验；第 部分：法测定蛋白质含量；第 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第 部分：的 值测定方法；第 部分：细胞器的分离实验方法；第 部分：细胞免疫功能体外检测方法；第 部分：体液免疫功能试验；第 部分：巨噬细胞功能试验；第 部分：流式细胞术检测凋亡；第 部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第 部分：生化需氧量（）测定。本部分为 系列标准的第 部分。本部分修改采用 毒理学实验方法与技术 中的流式细胞检测方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按 做了编辑性修改。本部分的附录 为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：冯智劼、王利兵、王华、李学洋、刘伟、丁宇。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：流式细胞术检测凋亡范围 的本部分规定了进出口危险化学品流式细胞术检测凋亡的术语和定义、试验方法和结果分析。本部分适用于进出口危险化学品流式细胞术检测凋亡的试验。术语和定义下列术语和定义适用于本部分。凋亡犪 狆 狅 狆 狋 狅 狊 犻 狊也称为“程序性细胞死亡”，是一种细胞受环境刺激后，在基因调控之下所产生的自然死亡现象。凋亡最初由特征性的形态变化来确定，包括：的程序性降解、染色质浓缩、细胞缩小和碎裂。它可以是生理性的，或由化疗药物及放射诱发。坏死狀 犲 犮 狉 狅 狊 犻 狊活体内局部组织、细胞的死亡称为坏死。坏死组织细胞的代谢停止，功能丧失。坏死的形态变化可以是由损伤细胞内的水解酶的降解作用引起，也可以由游走来的白细胞释放的水解酶的作用引起。流式细胞术 犳 犾 狅 狑犮 狔 狋 狅 犿 犲 狋 狉 狔是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的物理性质及化学性质，如细胞大小、内部结构、蛋白质、抗原等进行快速测定并可分类收集的一种现代分析技术。试验方法 仪器设备 流式细胞仪；普通低速离心机；漩涡混匀仪；微量加样器。试剂和耗材 试剂盒（含荧光标记的 ，和 ）；目过滤尼龙网；的滤膜；缓冲液（）和蒸馏水（用滤器滤过）；流式细胞仪的保养试剂；加样枪头。试剂如自行配置，和 和 的配置可以参见附录。犛 犖犜 试验步骤 细胞悬液的制备试验所用细胞可来源于各种组织也可为直接培养的细胞。若细胞来源于组织，需将其充分分离，并用 目尼龙网过滤，收集细胞悬液。将细胞用 缓冲液洗涤两次（），次，调整细胞浓度为 个。分组根据试验目的进行分组。要包含对照组，包括未标记的细胞、仅用 标记的细胞，仅用 染色的细胞。染色（如果使用试剂盒，加入试剂的剂量可以按说明书进行）取 （个细胞）到 流式加样管中；）加入荧光标记的 试剂至上述管中；）加入 染料 入加样管中 的加入量可以根据不同的目的细胞和试验方案进行调整，加入量可在（）管进行调整；）轻轻摇动细胞，避光，室温保存 。上机检测）在管中加入 的 （也可按照试剂盒的说明进行使用）；）在上流式细胞仪进行分析（选择相应的模块）。试验结果 不同阶段细胞的表型由于细胞花丝期间也可以出现（膜磷脂酰丝氨酸）的外露，应与检测细胞活性的染料 联合后用来区分不同细胞，结果见表。表不同阶段细胞的表型细胞类型 凋亡细胞（早期）机械性损伤细胞继发性坏死细胞正常细胞 数据处理选用适当的统计学方法对试验结果进行分析，判断受试物是否能引起凋亡，及在不同浓度下的凋亡的差别是否有统计学意义。犛 犖犜 附录犃（资料性附录）试剂的配置犃 犘 犅 犛的配置 用 或 调节 至 犃 犅 犻 狀 犱 犻 狀 犵犅 狌 犳 犳 犲 狉 保存于犃 犘 犐用 配成 的贮液，保存于。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口危险化学品安全试验方法第 部分：流式细胞术检测凋亡 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元