BJS 201710 保健食品中75种非法添加化学药物的检测.doc

附件1 保健食品中75种非法添加化学药物的检测 BJS 201710 1 范围 本方法规定了保健食品中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸的液相色谱-串联质谱检测方法。 本方法适用于片剂、口服液、硬胶囊和软胶囊保健食品中的利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸共75种非法添加物质的检测，同样适用于片剂、口服液、硬胶囊、软胶囊类声称具有保健功效的食品中上述75种物质的检测。 2 原理 试样经甲醇提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测。 3 试剂和材料 注：水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇（CH3OH)：色谱纯。 3.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 3.1.3 甲酸（CH2O2）：质谱级。 3.1.4 乙酸铵（CH3COONH4）：质谱级。 3.1.5 0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵水溶液：精密量取甲酸（3.1.3）1 mL，称取乙酸铵（3.1.4）0.771 g，用水溶解并定容至1000 mL。 3.2 标准品 利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子量见附录A表A.1，纯度均≥98%。 3.3 标准溶液配制 3.3.1 标准储备液：分别精密称取利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 01 g）于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得到浓度为1 mg/mL的储备液，-20 ℃避光贮存，有效期3个月。 3.3.2 混合标准溶液：分别精密量取储备液（3.3.1）适量，用甲醇（3.1.1）稀释成混合标准中间液，其中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、尼莫地平、辛伐他丁、氨氯地平、洛伐他丁、美伐他丁、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、褪黑素、芬氟拉明、可乐定、卡托普利、苯乙双胍、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸和二甲双胍浓度为10 μg/mL，洛伐他汀羟酸钠盐、呋塞米、氢氯噻嗪、司可巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥和烟酸浓度为100 μg/mL。再用初始流动相（见表1）稀释成混合标准使用液，上述物质浓度分别为100 ng/mL和1 μg/mL，临用时配制。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 4.2 分析天平：感量分别为0.001 g、0.000 1 g和0.000 01 g。 4.3 离心机：转速≥4 000 r/min。 4.4 超声波清洗器。 5 分析步骤 5.1 试样制备 精密称取样品1 g（精确至0.000 1 g），置于50 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.1）定容（若样品中含有油脂，则将样品提取液在-20 ℃条件下放置24~48 h，时间可视样品是否澄清而定），5 000 r/min离心5 min，上清液经微孔滤膜过滤(0.22 µm，有机相)，取续滤液作为待测液。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱条件 a）色谱柱：C18柱，1.8 μm，2.1×100 mm，或性能相当者。 b）流动相：A为0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵（3.1.5），B为乙腈（3.1.2），参考梯度洗脱程序见表1。 c）流速：0.3 mL/min。 d）柱温：40 ℃。 e）进样量：5 μL。 表1 参考梯度洗脱程序 时间/min A：0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵/% B：乙腈/% 0 90 10 2 90 10 2.1 65 35 4 65 35 4.1 60 40 6.5 60 40 7 20 80 9 20 80 9.1 10 90 5.2.2 质谱条件 a）电离方式：电喷雾正负离子模式。 b）检测方式：多反应检测（MRM）。 c）雾化气：N2。 d）干燥气流速：8 L/min。 e）喷雾电压：500 V。 f）气流温度：350 ℃。 g）毛细管电压：3500 V（+）3000 V（-）。 h）鞘气流速：11 L/min。 i）鞘气温度：250 ℃。 j）定性离子对、定量离子、碎裂电压、碰撞能量和离子化模式见表2。 表2 非法添加化学药物的主要质谱参数 序号 化合物 母离子（m/z） 子离子（m/z） 碎裂电压 （V） 碰撞能量 （eV） 离子化模式 1 利血平 609.2 448.1 135 28 + 609.2 397.1* 135 24 + 2 格列喹酮 528 403* 135 7 + 528 386 135 19 + 3 羟基豪莫西地那非 505 487* 135 20 + 505 377 135 20 + 4 硫代艾地那非 505 448 135 20 + 505 393* 135 20 + 5 格列苯脲 495 369 135 6 + 495 169* 135 18 + 6 格列美脲 491 352 135 7 + 491 126* 135 23 + 7 豪莫西地那非 489 311 135 20 + 489 113* 135 20 + 8 伐地那非 489 299 135 20 + 489 151* 135 20 + 9 西地那非 475 377 135 20 + 475 311* 135 20 + 10 红地那非 467 420 135 20 + 467 396* 135 20 + 11 伪伐地那非 460 432* 135 20 + 460 377 135 20 + 12 那莫西地那非 460 377 135 20 + 460 329* 135 20 + 13 瑞格列奈 453 162 135 20 + 453 86* 135 20 + 14 那红地那非 453 406 135 16 + 453 353* 135 24 + 15 格列吡嗪 446 347 135 7 + 446 321* 135 7 + 16 洛伐他丁羟酸钠盐 445 343* 135 10 + 445 173 135 30 + 17 尼莫地平 419 343* 135 10 + 419 301 135 20 + 18 辛伐他汀 419 285 135 20 + 419 199* 135 20 + 19 氨氯地平 409 294 135 10 + 409 238* 135 10 + 20 洛伐他汀 405 285 135 20 + 405 199* 135 20 + 21 美伐他汀 391 185* 135 20 + 391 159 135 20 + 22 氨基他达拉非 391 269* 135 20 + 391 262 135 20 + 23 他达拉非 390 302 135 20 + 390 268* 135 20 + 24 佐匹克隆 389.2 245* 135 10 + 389.2 217 135 20 + 25 尼索地平 389 239* 135 10 + 389 195 1