DB33T 616-2006 配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定 液相色谱法.doc

DB×× ××××—×××× DB33 浙江省质量技术监督局 发布 2006-12-27实施 2006-11-27发布 配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定 液相色谱法 Determination of nitrofurazone and furazolidone in formula feed- Liquid chromatography DB33/T 616—2006 浙江省地方标准 ICS 67.050 B 54 1 DB33/T 616—2006 前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由浙江省海洋与渔业局提出并归口。 本标准起草单位：农业部渔业环境及水产品质检中心（舟山）。 本标准主要起草人：陈雪昌、郑斌、刘士忠、钟志。 1 配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定 液相色谱法 1　 范围 本标准规定了配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的液相色谱测定方法。 本标准适用于配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定。 2　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 3　 原理 样品中呋喃西林和呋喃唑酮经乙腈提取，正己烷脱脂，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。 4　 试剂 本标准所用试剂在呋喃西林和呋喃唑酮出峰处应无干扰峰，实验用水应符合GB/T 6682中一级水标准。 4.1 呋喃西林标准品：纯度﹥99%。呋喃唑酮标准品：纯度﹥99%。 4.2 正己烷：分析纯。 4.3 乙腈：分析纯。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 磷酸二氢钠: 分析纯。 4.6 0.05mol/L磷酸二氢钠溶液。 4.70.01mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=2.5)，分析纯。 4.8乙二胺四乙酸(EDTA)溶液（50g/L），分析纯。 4.9 HLB固相萃取柱(150mg/3mL)。 4.10标准储备液：100mg/L，准确称取一定量的标准品, 用少量乙腈溶解后, 再用甲醇定容为100 mg/ L 的储备液, 避光冷藏保存，保存期为一个月。 4.11标准中间液：2mg/L，用流动相稀释标准储备液。临用时配制。 5　 仪器与设备 5.1 液相色谱仪：配紫外检测器。 5.2 样品粉碎机。 5.3 均质机。 5.4 离心机，4000rpm。 5.5 旋转蒸发器。 5.6 固相萃取装置。 5.7 超声仪。 5.8 旋涡混匀器。 5.9 氮吹仪。 5.10天平，感量为0.01g和0.0001g。 6　 色谱条件 6.1 色谱柱：ODS C-18，5μm，4.6mm×250mm，或同类型号色谱柱。 6.2 柱温：室温。 6.3 流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（pH= 4.0，体积比20：80）。 6.4 流速：1.0mL/min。 6.5 进样量：20μL。 6.6 紫外检测波长：365nm。 7　 分析步骤 7.1试样制备 按GB/T 14699.1采集实验室样品。将实验室样品（通常500g）粉碎，使之全部通过1mm筛，充分混匀。贮于磨口瓶中备用。 7.2提取 称取样品5g（准确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管，加入乙腈20mL，摇匀，超声波辅助提取10min，均质（10000r/min）2min，4000r/min离心5min，过滤，用20mL乙腈重复提取，合并滤液于125mL分液漏斗。 7.3净化 分液漏斗中加入25mL经乙腈饱和的正己烷，振摇5min，静置分层后，将乙腈层放入旋发瓶中，于40℃减压蒸馏浓缩近干，加入5mL 0.01mol/L磷酸盐缓冲液(4.7)溶解，待净化。 固相萃取柱依次以10mL甲醇，10mL纯水， 2mL 5%EDTA溶液，10mL纯水预淋洗，上样，以10mL甲醇洗脱，氮气吹至近干，流动相准确定容至2mL，经0.45μm滤膜过滤，待HPLC分析。 注意：所有操作都应在避光条件下进行。 7.4 工作曲线 取呋喃西林和呋喃唑酮标准中间液，用流动相稀释成浓度为0.1mg/L～2. 0 mg/L的标准工作液。分别取20μL进样，以峰高为纵坐标，以标准样品中呋喃西林和呋喃唑酮含量为横坐标，绘制工作曲线。 7.5 色谱测定 取试样滤液20μL进样，记录峰高，从工作曲线查得样品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。若样液浓度超过线性范围，用流动相稀释。 8　 计算 样品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式计算。 × 式中：X——试样中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C——试样溶液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，单位为毫克每升（mg/L）； m——试样质量，单位为克（g）； V——试样溶液体积，单位为毫升（mL）。 f——提取液的稀释倍数。 9　 方法准确度和精密度 本方法回收率为81.6%-91.6%。 本方法的相对标准偏差为＜10%。 10　 方法检出限 本方法检出限为1.0 mg/kg。 11　 线性范围 本方法的呋喃西林和呋喃唑酮标准溶液的线性范围为0.10 mg/L -2.0 mg/L。 12　 结果表述 检验结果保留2位有效数字。 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 附录A （资料性附录） 呋喃西林和呋喃唑酮高效液相色谱图 图A.1呋喃西林和呋喃唑酮标准品色谱图 ———————————— 3