中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２５３１—２０１０贝类和水样中札如病毒检测方法普通犚犜犘犆犚方法和实时荧光犚犜犘犆犚方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犛犪狆狅狏犻狉狌狊犻狀狊犺犲犾犾犳犻狊犺犪狀犱狑犪狋犲狉—犆狅狀狏犲狀狋犻狅狀犪犾犚犜犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犚犜犘犆犚２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：潘良文、卢钟山、邓恬宁、吕蓉、张舒亚、李想、刘月明、高琴。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２５３１—２０１０贝类和水样中札如病毒检测方法普通犚犜犘犆犚方法和实时荧光犚犜犘犆犚方法１范围本标准规定了贝类和水样中札如病毒普通ＲＴＰＣＲ方法和实时荧光ＲＴＰＣＲ方法。本标准适用于贝类和水样中札如病毒的定性检测。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＳＮ／Ｔ１１９３基因检验实验室技术要求３术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１犆狋值犮狔犮犾犲狋犺狉犲狊犺狅犾犱每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。３．２质粒标准分子狆犾犪狊犿犻犱狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿狅犾犲犮狌犾犲一种包含病毒特异性ｃＤＮＡ片段的重组质粒分子，可作为病毒ＰＣＲ检测中的阳性对照。４方法提要用合适的裂解液（如Ｔｒｉｒｅａｇｅｎｔ）提取贝类样品中病毒ＲＮＡ，并根据札如病毒ＲＮＡ３’末端含有Ｐｏｌｙ（Ａ）的结构，用连接Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）２５的磁珠特异性吸附札如病毒ＲＮＡ进行纯化。对水样中的病毒进行富集后，采用合适的方法提取和纯化病毒ＲＮＡ。利用普通ＲＴＰＣＲ或实时荧光ＲＴＰＣＲ方法进行检测。本研究通过构建质粒标准分子（每个质粒分子包含１拷贝扩增片段），确定札如病毒普通ＲＴＰＣＲ体系检测下限为１００拷贝，实时荧光ＲＴＰＣＲ体系检测下限均为１０拷贝。５试剂所有实验用试剂均为分析纯；除特别说明外...
