SNT 2497.16-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第16部分：Western-Blot实验.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犠 犲 狊 狋 犲 狉 狀 犅 犾 狅 狋实验犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊犘 犪 狉 狋 ：犠 犲 狊 狋 犲 狉 狀犅 犾 狅 狋 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分：第部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（）试验；第部分：空斑形成细胞（）试验；第部分：大型溞繁殖试验；第部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第部分：睾丸细胞 试验；第部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第部分：小鼠耳肿胀试验；第部分：腘窝淋巴结试验；第部分：血清溶血素测定试验；第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验；第 部分：种系突变试验；第 部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第 部分：荧光原位杂交试验；第 部分：聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第 部分：实验；第 部分：实验；第 部分：哺乳动物行为毒理学试验；第 部分：加合物的检测方法；第 部分：实验；第 部分：法测定蛋白质含量；第 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第 部分：的 值测定方法；第 部分：细胞器的分离实验方法；第 部分：细胞免疫功能体外检测方法；第 部分：体液免疫功能试验；第 部分：巨噬细胞功能试验；第 部分：流式细胞术检测凋亡；第 部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第 部分：生化需氧量（）测定。本部分为 系列标准的第 部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、于艳军、赵好力宝、王华、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犠 犲 狊 狋 犲 狉 狀 犅 犾 狅 狋实验范围 的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中 实验的术语和定义、主要试剂、试验步骤和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品安全试验 实验。术语和定义下列术语和定义适用于本部分。犠 犲 狊 狋 犲 狉 狀 犅 犾 狅 狋一般称为免疫着色或免疫印迹，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。第一抗体 犳 犻 狉 狊 狋 犪 狀 狋 犻 犫 狅 犱 狔以待测蛋白质作为抗原的对应抗体。第二抗体 狊 犲 犮 狅 狀 犱犪 狀 狋 犻 犫 狅 犱 狔以碱性磷酸酶标记的，能够与第一抗体结合的抗体。试剂 转移缓冲液称取甘氨酸，碱，十二烷基磺酸钠（），加适量水使固体溶解后，加入甲醇 ，补水至 。丽春红犛贮存液称取丽春红，三氯乙酸，磺基水杨酸，加水溶解，定容至 ，室温保存，用时稀释 倍。犜 犅 犛溶液称取 碱、和 ，加水溶解后，用稀盐酸调 值至，定容至 ，在 （）高压下蒸汽灭菌 ，室温保存。犜 犅 犛 犜溶液在 中按 加入 ，室温保存。碱性磷酸酶缓冲液 （值），室温保存。氮蓝四唑（犖 犅 犜）贮存液 溶于 二甲基甲酰胺（）中。溴 氯 吲哚磷酸盐（犅 犆 犐 犘）贮存液 溶于 二甲基甲酰胺（）中。犛 犖犜 磷酸盐缓冲液（犘 犅 犛）称取 、和 ，溶于 蒸馏水中，用 调节 值至，定容至 ，（）高压下蒸汽灭菌 ，室温保存。试验步骤 聚丙烯酰胺凝胶的准备将进行完 聚丙烯酰胺凝胶电泳后的凝胶浸泡于转移缓冲液中。半干法转移蛋白质将硝酸纤维素滤膜和六张相同尺寸的普通滤纸于转移缓冲液中浸泡 。由下至上 安 装 转 移 装 置：阳 极 板 三 层 滤 纸 滤 膜 凝 胶 三 层 滤 纸 阴 极 板，根 据 凝 胶 面 积 按 接通电流，转移。将转移后的硝酸纤维素滤膜用水冲洗，丽春红染色，然后标记标准蛋白质的位置并用水冲洗干净。如采用预染标准蛋白，可省却此步骤。封闭用封闭液（含脱脂奶粉的 ）于平板摇床上摇动封闭。第一抗体结合按 的量加入适当比例稀释的第一抗体，在室温下持续摇动以上。弃去第一抗体工作液，用 洗涤滤膜 ，更换 后再洗涤 再次更换 后洗涤 ，最后用 洗涤滤膜 。第二抗体结合加入第二抗体工作液室温下持续摇动。弃去第二抗体工作液，以 漂洗硝酸纤维素滤膜三次，每次 ，最后用 漂洗滤膜 。显色配制生色底物：将 贮存液加入到 碱性磷酸酶缓冲液中，混匀，然后加入 贮存液，内使用。按滤膜面积加入 的生色底物，当蛋白条带的颜色深度达到要求后，取出滤膜，浸入 （值）和 中。结果保存拍摄滤膜照片，保存结果，滤膜可用热封机封合后保存。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犠 犲 狊 狋 犲 狉 狀 犅 犾 狅 狋实验 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元