ICS65.020.20B21DB32江苏省地方标准DB32/T3860—2020玉米品种及纯度鉴定技术规程SNP标记法Technicalregulationforidentificationofmaizevarietiesandpurity—SNPmarkermethod2020-10-13发布2020-11-13实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T3860—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由江苏省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草人：赵涵、张体付、吕远大、陈艳萍、林峰、陆海燕、梁帅强。IDB32/T3860—2020玉米品种及纯度鉴定技术规程SNP标记法1范围本标准规定了利用SNP（singlenucleotidepolymorphism）标记进行玉米品种及纯度鉴定的原理、仪器设备及试剂、引物信息、操作步骤等要求。本标准适用于玉米自交系、单交种及纯度的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1SNP标记singlenucleotidepolymorphismmarker基于单核苷酸多态性的分子标记。3.2推荐引物recommendedprimer品种鉴定中优先选用的一套SNP引物，其检测位点多态性高，检测结果重复性好。3.3竞争性等位基因特异性PCR（KASP,KompetitiveAlleleSpecificPCR）通过引物末端特异性碱基竞争性匹配DNA模板实现SNP基因分型的链式聚合酶反应。3.4品种纯度varietalpurity品种在DNA分子标记基因分型方面一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占供检样品种子总数的百分率表示。1DB32/T3860—20204原理玉米基因组中普遍存在着单碱基的变异，不同品种同一SNP位点的基因型可利用适宜引物通过KASP检出，进而根据SNP位点基因型的差异鉴定品种及纯度。5仪器设备及试剂见附录A。6引物信息见附录B。7操作步骤7.1样品DNA提取7.1.1样品准备试验样品种子的分样与保存，应符合GB/T3543.2的规定。7.1.2用于品种鉴定样品DNA提取从送检样品中随机抽取10粒种子发苗。分单株剪取100mg幼苗用液氮研磨，将研磨粉末转入2mL离心管，加入0.5mL2×CTAB提取缓冲液充分混匀。在55℃～65℃恒浴30min。加入1mL氯仿:异戊醇（24：1），充分摇动5min，8000g，室温下离心5min。取上清液加入0.6×体积异丙醇，室温下静置30min，5000g，4℃离心5min。沉淀用0.8mL高盐缓冲液充分溶解，15000g离心2min。上清加...
