SNT 2127-2008 进出口动物源性食品中β-内酰胺类药物残留检测方法 微生物抑制法.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中 内酰胺类药物残留检测方法微生物抑制法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犾 犪 犮 狋 犪 犿狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犕 犐 犃犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前言本标准的附录 为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑晶、黄晓蓉、吴谦、冯家望、翁国柱、张体银、郑麟毅、吴芸芸。本标准系首次发布的出入境检验检疫标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口动物源性食品中 内酰胺类药物残留检测方法微生物抑制法范围本标准规定了动物源性食品中 内酰胺类药物残留检测的试样制备、保存和微生物抑制检测方法。本标准适用于牛奶、肉类、鱼和虾中的苄青霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、苯唑青霉素和头孢噻呋等药物残留筛选检测，阳性结果应用其他方法进行确证。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法（，：，）试样制备和保存 试样制备 牛奶：取不少于 试样，装入清洁容器内，并标明标记。肉类、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于 试样。装入清洁容器内，并标明标记。制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。试样保存 牛奶：保存。肉类、鱼和虾：试样于 以下保存，新鲜或冷冻组织样品可在保存。测定方法 方法提要试样经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。设备和材料 恒温箱：。离心机。高速组织捣碎机。恒温水浴锅：。涡旋振荡器。显微镜：。游标卡尺：测量范围 ，精度 或抑制圈测量仪。灭菌平皿：直径，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。圆形滤纸片：直径，厚。日本 ，产品或同类产品。克氏瓶。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 可调移液器：，。菌种和培养基 菌种嗜热脂肪芽孢杆菌犅 犪 犮 犻 犾 犾 狌 狊 狊 狋 犲 犪 狉 狅 狋 犺 犲 狉 犿 狅 狆 犺 犻 犾 狌 狊 。培养基 细菌保存培养基：见附录 第 章。菌种芽孢培养基：见附录 第 章。检定培养基：见附录 第 章。试剂除非另有说明，本标准所用化学试剂均为分析纯，试验用水应符合 的规定。犿 狅 犾犔盐酸溶液量取 浓盐酸用蒸馏水稀释至 。犿 狅 犾犔氢氧化钠准确称取 氢氧化钠，溶解于 蒸馏水中。缓冲液 磷酸盐缓冲液：称取 磷酸二氢钾（）及 磷酸氢二钾（），用蒸馏水溶解并定容至 ，高压灭菌 。磷酸盐缓冲液 丙酮磷酸盐缓冲液 丙酮：按体积比 磷酸盐缓冲液丙酮比例制备。抗生素标准液 标准品：苄青霉素，纯度。苄青霉素标准储备液：准确称取适量的苄青霉素标准品，用灭菌 磷酸盐缓冲液（）溶解并定容至 ，置冰箱保存，贮存期。苄青霉素标准工作液：吸取适量的苄青霉素标准储备液，用 磷酸盐缓冲液（）稀释成 的标准工作液，应当日配制使用。测定步骤 样液提取 牛奶：取 鲜奶于 离 心 管，离 心 ，除 去 上 层 脂 肪 层，以 盐酸溶液或 氢氧化钠调节 至 。脱脂奶可直接用于检测。肉类、鱼和虾：称取 均质好的试样于 离心管中，加入磷酸盐 丙酮缓冲液 ，用涡旋振荡器充分振荡 ，于 水浴保温 后，离心 取上清液作为样液。菌悬液的制备嗜热脂肪芽孢杆菌 菌悬液：一般情况下，菌种的传代次数不应超过代，否则在每次使用前确证其生化特性没有发生变异，或另需购置新的标准菌株。在确定保存的菌种生化特性没有改变后，将复活的菌种分别接种于盛有增菌用固体培养基的克氏瓶中，培养 镜检芽孢数达 以上（如果达不到，可再培养数日，芽孢数仍达不到要求，菌种可能变异，不可使用），用灭菌生理盐水洗下菌苔，使其悬浮于生理盐水中，水浴加热 ，经 离心 ，弃去上清液，如此重复洗涤芽孢两次。然后用适量灭菌生理盐水制成菌悬液，用稀释平板计数的方法或比浊法进行计数以确定菌种的浓度。置冰箱保存，贮存期。检定用平板的制备将试验菌悬液按一定的比例加入到融化后冷却至 左右的灭菌检定培养基中充分混匀后，使平板中的嗜热脂肪芽孢杆菌的浓度达到 。在灭菌平皿中加入 混合液，保持水平犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售待其凝固。取制备好的检定用平板两个，分别放置两个滤纸片，加入约 （以纸片吸满为准）苄青霉素标准工作液，冷藏放置 后，培养 能产生 以上清晰、完整抑菌圈的平板为合格，达不到要求的平板应弃去。制备好的平板置 冰箱可保存。测定取制备好的检定用平板两个，在平板底部作好标记，将滤纸片适当间隔置于平板上，每个平板最多不超过个，在其中一个滤纸片加入约（以纸片吸满为准）苄青霉素标准工作液作为阳性对照，其余的滤纸片中加入约 样液，冷藏放置 后，培养 后开始观察，如果 苄青霉素标准工作液产生清晰、完整的抑菌圈且大于 时终止培养，记录标准工作液和样液的抑菌圈结果。每份样品做两个平板上的平行试验。检测结果判断和报告 如果样液在平板上无抑菌圈，苄青霉素标准工作液的抑菌圈直径大于，即报告“阴性”。如果样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径在 以上，即报告“初筛阳性”。如果样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径小于，大于，或者两个平行结果不一致时，视为可疑，应重新测试后判定。阳性样品需要用确证方法进行定性及定量分析。检测限本标准的检测限见表。表 内酰胺类药物检测限 内酰胺类药物名称牛奶的检测限（）肉类、鱼和虾的检测限（）苄青霉素 氨苄青霉素 羟氨苄青霉素 邻氯青霉素 双氯青霉素 苯唑青霉素 头孢噻呋 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（规范性附录）培养基犃 细菌保存培养基犃 成分胰蛋白胨 植物蛋白胨 氯化钠 琼脂 蒸馏水 犃 制法将各成分加热溶解，分装试管，高压灭菌 ，制成斜面。注：制成半固体时，琼脂量为。犃 菌种芽孢培养基犃 成分胰蛋白胨 植物蛋白胨 氯化钠 磷酸氢二钾 蒸馏水 琼脂 犃 制法将各成分加热溶解，分装 于克氏瓶内，高压灭菌 。犃 检定培养基犃 成分牛肉膏 蛋白胨 大豆蛋白胨 葡萄糖 氯化钠 磷酸氢二钾 吐温 溴甲酚紫 琼脂 蒸馏水 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犃 制法 溴甲酚紫溶液配制：称取 溴甲酚紫溶于 蒸馏水中。将各成分加热溶解，分装每瓶 ，每瓶中加入 溴甲酚紫溶液，高压灭菌 。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲 犼 狌 狉 犻 狊 犱 犻 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犉 狌 犼 犻 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌犪 狀 犱犣 犺 狌 犺 犪 犻 犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犕 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狅 犳 狋 犺 犻 狊 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犣 犺 犲 狀 犵犑 犻 狀 犵，犎 狌 犪 狀 犵犡 犻 犪 狅 狉 狅 狀 犵，犠狌犙 犻 犪 狀，犉 犲 狀 犵犑 犻 犪 狑 犪 狀 犵，犠 犲 狀 犵犌 狌 狅 狕 犺 狌，犣 犺 犪 狀 犵犜 犻 狔 犻 狀，犣 犺 犲 狀 犵犔 犻 狀 狔 犻 犪 狀 犱犠狌狔 狌 狀 狔 狌 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犾 犪 犮 狋 犪 犿狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犕 犐 犃犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀，狆 狉 犲 狊 犲 狉 狏 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犿 犻 犮 狉 狅 犫 犻 犪 犾 犻 狀 犺 犻 犫 犻 狋 犻 狅 狀犪 狊 狊 犪 狔犿 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉犱 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳 犾 犪 犮 狋 犪 犿狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲狋 狅狋 犺 犲狊 犮 狉 犲 犲 狀 犻 狀 犵犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳犅 犲 狀 狕 狔 犾狆 犲 狀 犻 犮 犻 犾 犾 犻 狀，犃犿 狆 犻 犮 犻 犾 犾 犻 狀，犃犿 狅 狓 犻 犮 犻 犾 犾 犻 狀，犆 犾 狅 狓 犪 犮 犻 犾 犾 犻 狀，犇 犻 犮 犾 狅 狓 犪 犮 犻 犾 犾 犻 狀，犗 狓 犪 犮 犻 犾 犾 犻 狀犪 狀 犱犆 犲 犳 狋 犻 狅 犳 狌 狉 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犻 犾 犽，犿 犲 犪 狋，犳 犻 狊 犺犪 狀 犱狊 犺 狉 犻 犿 狆 犃 狀 狔狆 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲狉 犲 狊 狌 犾 狋狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犮 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犲 犱犫 狔狅 狋 犺 犲 狉犿 犲 狋 犺 狅 犱 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犚 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮 犺，狋 犺 狉 狅 狌 犵 犺狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犻 狀狋 犺 犻 狊 狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉犱 犪 狋