SNT 2059-2008 进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法 酶联免疫法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狊 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀犪 狀 犱犱 犻 犺 狔 犱 狉 狅 狊 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犈 狀 狕 狔 犿 犲 犾 犻 狀 犽 犲 犱 犻 犿犿 狌 狀 狅 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋 犪 狊 狊 犪 狔 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布前?言本标准的附录?为资料性附录?本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口?本标准起草单位?中华人民共和国浙江出入境检验检疫局?本标准主要起草人?施伟良?张晓峰?朱振江?程洁?苏宗仁?本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准?进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法?酶联免疫法?范围本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法?本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留总量的测定?规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款?凡是注明日期的引用文件?其随后所有的修改单?不包括勘误的内容?或修订版均不适用于本标准?然而?鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本?凡是不注明日期的引用文件?其最新版本适用于本标准?分析实验室用水规格和试验方法?方法提要本标准以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质?提取残留的链霉素和双氢链霉素?然后以?柱净化?处理后样品中残留的链霉素和双氢链霉素与酶标记链霉素共同竞争结合链霉素抗体?同时链霉素抗体结合至包被有绵羊抗兔?的抗体的微孔板上?通过洗涤除去未结合的链霉素和双氢链霉素和酶标记链霉素?然后加入底物显色?用酶标仪测定吸光度?根据吸光度值得出蜂王浆中链霉素和双氢链霉素的含量?试剂和材料除去注明外?所有试剂均为分析纯?水为?规定的一级水?链霉素检测试剂盒?参见附录?甲醇?缓冲溶液?称取?磷酸氢二钠?磷酸二氢钾?氯化钾?氯化钠?吐温?用水定容至?用磷酸?氢氧化钠调节?至?庚烷磺酸钠缓冲液?称取?庚烷磺酸钠?磷酸钠?用水溶解并定容至?用磷酸调节?至?甲醇?量取?甲醇?用水定容至?小柱?或相当产品?链霉素和双氢链霉素标准品?纯度大于等于?链霉素和双氢链霉素标准品溶液的配制?称取?链霉素或双氢链霉素?用甲醇定容至?配制成?的储存液?于?条件下保存?仪器?酶标仪?道移液器?单道移液器?和?混合振荡器?高速低温离心机?固相萃取装置?氮吹仪?具塞试管?电子天平?酸度计?试样的制备和保存?试样的制备原始样品总量不得少于?蜂王浆充分搅拌均匀后?将样品分成两等份?冻干粉采用四分法?将样品分成两等份?分好的样品装入洁净容器?加封并做标识?试样的保存试样放置?条件下保存?分析步骤?提取称取?蜂王浆样品?置于?具塞试管中?加入?庚烷磺酸钠缓冲液?充分混匀?条件下?离心?直至清亮?取上层液备用?小柱?依次用?甲醇?和?水活化?吸取?样品提取液上柱?然后?水洗?甲醇?洗柱?去除残留的液体?氮气吹?干燥柱子?然后以?甲醇?洗脱?将样品收集于干净塑料试管?氮气吹干?以?缓冲液?溶解吹干残留物?用于?检测?最后样品稀释倍数为?王浆冻干粉则用水以?比例稀释?充分浸泡?以上?后?称取?按照上述王浆前处理方法进行提取?最后以?缓冲液溶解吹干残留物?最后样品稀释倍数为?测定条件?操作条件所有操作应在室温下?进行?链霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温?后方可使用?洗板条件人工洗涤次数?次以上?每次加入洗涤液量为?自动洗板可以预定?次?酶标仪测定条件酶标仪测定波长为?测定步骤?将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上?记录标准品及样品等在微孔架上的位置?吸取?零浓度标准品于孔?并吸取?零浓度标准品于孔?分别吸取?链霉素标准溶液?浓度分别为?于孔?分别吸取?样品提取液于其余微孔中?测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头?分别吸取?链霉素酶标记物溶液于除?外的每一个微孔?分别吸取?链霉素抗体溶液于除?外的每一个微孔?用封口膜封孔条?并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀?给出该信息是为了方便本标准的使用者?并不表示对某一产品操作步骤的认可?如果其他产品的操作步骤有不同?需经实验评估后采用?将酶标板置于?避光温育?倒出孔中的液体?将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打?以除去孔中过多的残液?但不能使微孔干燥?然后立即用洗涤缓冲液按?条件进行洗板?要注意不能使微孔干燥?迅速加入?底物溶液于每一个微孔底部?然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后?于?避光温育?加入?反应终止液于每一个微孔?然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后?将微孔架置于酶标仪中?在?处测量吸光度?应在加入反应终止液后?内读取吸光度?平行试验按以上步骤?对同一标准溶液?同一样品溶液均应进行平行试验测定?空白试验除不加入试样外?均按上述步骤进行?阳性质控每次测定均应做一个添加链霉素和双氢链霉素标准品溶液?的监控样品测定?以确定实验过程的操作准确性?结果计算从标准品和样品的吸光度?值中?减去空白孔?的平均?值?标准品和样品的?平均值除以零标准?的平均?值?再乘以?零标准为?最大百分比吸光度值?其他?值为最大吸光度值的百分数?以吸光度的百分比值?为纵坐标?链霉素标准溶液浓度?的对数值为横坐标?绘制标准工作曲线?从标准工作曲线上得到试样中相应的链霉素浓度后?结果按式?进行计算?式中?样品中链霉素和双氢链霉素的残留总量?单位为微克每千克?从标准工作曲线上得到的样品中链霉素和双氢链霉素浓度?单位为纳克每毫升?样品溶液的最终定容体积?单位为毫升?样品溶液所代表的最终试样质量?单位为克?也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算?所得结果表示至一位小数?确证试验如被测样品中为阳性结果时?应用其他方法进行确证?本方法测定低限和回收率?方法测定低限?回收率本方法中链霉素和双氢链霉素添加浓度及回收率的试验数据?链霉素?添加量为?时?回收率为?添加量为?时?回收率为?添加量为?时?回收率为?双氢链霉素?添加量为?时?回收率为?添加量为?时?回收率为?添加量为?时?回收率为?附?录?资料性附录?链霉素试剂盒?荷兰?公司产品?试剂盒组成?预包被抗体的?孔板?条?孔?链霉素标准溶液?和?链霉素酶标记物冻干粉?根据链霉素试剂盒中说明?可用稀释缓冲液配制成链霉素酶标记物溶液?抗链霉素抗体冻干粉?根据链霉素试剂盒中说明?可用稀释缓冲液配制成抗链霉素抗体溶液?底物?溶液?稀释缓冲液?洗涤浓缩液?可用水?倍稀释后使用?反应终止液?试剂盒应在?避光条件下保存?溶解后的酶标记物和抗体溶液需?条件冻存?标准校准曲线标准校准曲线见图?图?链霉素标准曲线?给出该信息是为了方便本标准的使用者?并不表示对某一产品的认可?如果其他产品具有相同的效果?需经实验评估后使用这些等效产品?犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元