SNT 2497.26-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第26部分：巨噬细胞功能试验.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：巨噬细胞功能试验犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊犘 犪 狉 狋 ：犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犿 犪 犮 狉 狅 狆 犺 犪 犵 犲 犳 狌 狀 犮 狋 犻 狅 狀 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分：第部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（）试验；第部分：空斑形成细胞（）试验；第部分：大型溞繁殖试验；第部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第部分：睾丸细胞 试验；第部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第部分：小鼠耳肿胀试验；第部分：腘窝淋巴结试验；第部分：血清溶血素测定试验；第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验；第 部分：种系突变试验；第 部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第 部分：荧光原位杂交试验；第 部分：聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第 部分：实验；第 部分：实验；第 部分：哺乳动物行为毒理学试验；第 部分：加合物的检测方法；第 部分：实验；第 部分：法测定蛋白质含量；第 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第 部分：的 值测定方法；第 部分：细胞器的分离实验方法；第 部分：细胞免疫功能体外检测方法；第 部分：体液免疫功能试验；第 部分：巨噬细胞功能试验；第 部分：流式细胞术检测凋亡；第 部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第 部分：生化需氧量（）测定。本部分为 系列标准的第 部分。本部分修改采用 免疫学实验技术 中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在部分文本格式上按 做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李晶、王利兵、王华、冯智劼、于智睿、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：巨噬细胞功能试验范围 的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中巨噬细胞功能试验的试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于检测进出口危险化学品的免疫毒性的巨噬细胞功能试验。规范性引用文件下列文件中的条款通过 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。实验动物配合饲料通用质量标准 实验动物环境及设施试验原理巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。试验方法 试验动物 小鼠、昆明品系小鼠，雌或雄，。试验动物饲养条件应符合 和 的有关规定。试剂 白色念珠菌悬液：接种于沙氏培养基的白色念珠菌，培养 ，生理盐水洗，配成 个 细胞悬液。无菌淀粉。液（含小牛血清）。美兰（存放）。试验步骤 体内法试验前天，小白鼠腹腔注射无菌淀粉液，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。试验时，每只小鼠腹腔注射白色念珠菌菌液，轻揉腹部，使菌液在腹腔中分布均匀，利于吞噬。后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用接种环取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴 冷美兰，盖上盖玻片。高倍镜下进行观察，计数。体外法将的消毒淀粉液 注入小鼠腹腔。后，拉颈处死小鼠，剖腹，吸取腹腔液，犛 犖犜 离心 ，收集巨噬细胞。以 液洗涤，离心 ，重复二次。计数巨噬细胞，以 液配制 个 细胞悬液。取华氏管，加入等量的 个 的巨噬细胞悬液及 个 白色念珠菌菌液。，温育 （中间摇动试管二次）。离心 ，弃上清液。轻轻振荡试管，取悬液一滴加至载玻片，取冷美兰一滴，混匀后，加盖玻片。高倍镜观察并计数。试验结果按式（）、式（）、式（）计算评价巨噬细胞的吞噬功能：吞噬百分率 个巨噬细胞内发生吞噬的巨噬细胞数 （）吞噬指数发生吞噬的 个巨噬细胞内含有的白色念珠菌数 （发生吞噬的巨噬细胞数）（）杀菌率被吞入的白色念珠菌中死亡数被吞入的白色念珠菌数 （）注：杀死的细菌呈蓝色，活菌不着色。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口危险化学品安全试验方法第 部分：巨噬细胞功能试验 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元