SNT 2497.15-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第15部分：PCR-SSCP实验.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犘 犆 犚 犛 犛 犆 犘实验犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊犘 犪 狉 狋 ：犜 犲 狊 狋 狅 犳犘 犆 犚 犛 犛 犆 犘 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分：第部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（）试验；第部分：空斑形成细胞（）试验；第部分：大型溞繁殖试验；第部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第部分：睾丸细胞 试验；第部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第部分：小鼠耳肿胀试验；第部分：腘窝淋巴结试验；第部分：血清溶血素测定试验；第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验；第 部分：种系突变试验；第 部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第 部分：荧光原位杂交试验；第 部分：聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第 部分：实验；第 部分：实验；第 部分：哺乳动物行为毒理学试验；第 部分：加合物的检测方法；第 部分：实验；第 部分：法测定蛋白质含量；第 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第 部分：的 值测定方法；第 部分：细胞器的分离实验方法；第 部分：细胞免疫功能体外检测方法；第 部分：体液免疫功能试验；第 部分：巨噬细胞功能试验；第 部分：流式细胞术检测凋亡；第 部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第 部分：生化需氧量（）测定。本部分为 系列标准的第 部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：于艳军、王利兵、王华、陈春、李学洋、赵黎华。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犘 犆 犚 犛 犛 犆 犘实验范围 的本部分规定了进出口危险化学品 实验的主要试剂和材料、主要仪器设备、试验步骤和试验结果。本部分适用于可能引起 片段中碱基突变的进出口危险化学品的筛查。术语、定义和缩略语 术语和定义下列术语和定义适用于本部分。基因突变犵 犲 狀 犲犿 狌 狋 犪 狋 犻 狅 狀由于 分子中发生碱基对的增添、缺失或改变而引起的基因结构的改变。缩略语下列缩略语适用于本部分。聚合酶链式反应 单链构象多态性 ，四甲基乙二胺原理单链 片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链 分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同。因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可以非常敏锐地将构象上有差异的分子分离开。该方法为单链构象多态性分析。将 用于检查 扩增产物的基因突变，即为 技术。试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。丙烯酰胺：丙烯酰胺，亚甲双丙烯酰胺，加蒸馏水至 ，加热至 溶解，补加水至终体积为 ，过滤除菌。：碱，硼酸，调节 值至。过硫酸铵：过硫酸铵溶于 水中，保存数周。上样缓冲液：溴酚蓝，二甲苯青，甘油水溶液，保存。犛 犖犜 仪器设备 电泳仪。聚丙烯凝胶电泳槽。试验步骤 犘 犆 犚反应液总体积为，在 管中加入下列反应成分：）；）；）模板 。引物及 聚合酶依实验设计要求按比例加入：）（）；）加 至。按实验设计循环参数进行扩增，获取扩增产物。聚丙烯酰胺凝胶制备根据分离的 片段的大小不同，按表和表配制不同浓度的丙烯酰胺凝胶溶液。每 丙烯酰胺凝胶溶液加 ，混匀，立即铺胶，插入梳子，于室温聚合 。表犇 犖 犃在聚丙烯酰胺凝胶中的有效分离范围丙烯酰胺含量有效分离范围 表制备聚丙烯酰胺凝胶所用试剂的体积试剂制备不同浓度凝胶所用试剂 丙烯酰胺 水 过硫酸铵 上样小心取出梳子，用水冲洗加样孔。取 的 产物，加适量上样缓冲液混合后，煮沸变性 ，立即冰浴，上样。电泳接上电极，（）的电压下进行电泳。电泳至标准参照染料迁移至所需位置，停止电泳。犇 犖 犃的检测 溴化乙锭染色将凝胶浸在含 溴化锭的 缓冲液中染色（），在紫外灯下观察。犛 犖犜 银染将凝胶用蒸馏水洗两次，浸入 乙醇和 冰醋酸溶液固定 ；用蒸馏水洗两次，作用 ，再浸入 （甲醛）溶液中 ；用蒸馏水洗（）次，然后浸入 预冷碳酸钠（含 甲醛）溶液中显色，最后，用 终止显色。试验结果观察并记录聚丙烯酰胺凝胶上的 单链带，根据异常泳动变位筛查突变样本。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犘 犆 犚 犛 犛 犆 犘实验 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元