中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４８２—２０１０马铃薯丛枝植原体检疫鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳狆狅狋犪狋狅狑犻狋犮犺犲狊’犫狉狅狅犿狆犺狔狋狅狆犾犪狊犿犪２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准的附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：王秀芬、赵文军、刘伟、彭金火、牟海青、周铭、朱水芳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４８２—２０１０马铃薯丛枝植原体检疫鉴定方法１范围本标准规定了马铃薯丛枝植原体的检疫鉴定方法。本标准适用于所有进境种薯、商品薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质中马铃薯丛枝植原体的检疫鉴定。２原理２．１学名和分类地位学名：Ｐｏｔａｔｏｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ缩写：ＰＷＢ分类地位：细菌界（Ｂａｃｔｅｒｉａ），硬壁菌门（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ），柔膜菌纲（Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ），非固醇菌原体目（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ），非固醇菌原体科（Ａｅｈｏｌｅｐｌａｓｍａｔａｃｅａｅ），植原体属（犘犺狔狋狅狆犾犪狊犿犪），三叶草丛蔟组（Ｃｌｏｖｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，１６ＳｒⅥ）。其他资料参见附录Ａ。２．２鉴定原理马铃薯丛枝植原体的分子生物学特性为本标准鉴定方法的主要依据。３仪器和用具３．１仪器设备：ＰＣＲ仪、超净工作台、电泳仪、凝胶成像分析仪、冷冻离心机、电子天平（１／１００００ｇ）、ｐＨ计、水浴锅、振荡器等。３．２用具；可调移液器（０μＬ～２０μＬ、２０μＬ～２００μＬ、２００μＬ～１０００μＬ）及相关吸头、研钵、离心管（１．５ｍＬ、１０ｍＬ）、ＰＣＲ管（０．２ｍＬ）、量筒、烧杯、镊子等。４试剂４．１研磨液磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠（ＮａＨ２ＰＯ４）０．０３ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ１０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０）蔗糖１０％（质量浓度）ＰＶＰ４０２％（质量浓度）调整ｐＨ至７．６，然后过滤除菌。使用前加入０．１５％（质量浓度）牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和１ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸维生素Ｃ。４．２犆犜犃犅缓冲液ＣＴＡＢ２％（质量浓度）ＴｒｉｓＨＣｌ１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐ...
