SNT 1961.19-2013 出口食品过敏原成分检测 第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分.pdf

SN/T1961.19-20135试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1大豆成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分）引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18 SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA大豆5端引物GCCCTCTACTCCACCCCCA大豆3端引物GCCCATCTGCAAGCCTTTTT大豆Lectin基因大豆探针FAM-AGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCAC-TAMRA5.2CTAB缓冲液：55mmol/L CTAB,1400mmol/LNaCl,.20mmol/L EDTA,100mmol/L Tris,用10%盐酸调pH至8.0,121，高压灭菌20min,备用。5.3TE缓冲液(Tris-Cl、EDTA缓冲液)：l0mmol/L Tris-.HCl(pH8.0),1mmol/L EDTA(pH8.0)。5.4蛋白酶K:20mg/L。5.5RNA酶溶液：5g/L。5.6Tris饱和酚。5.7三氯甲烷。5.8异戊醇。5.9异丙醇。5.1070%乙醇。5.11 Tag DNA聚合酶。5.12dNTP混合液。5.1310PCR缓冲液：200mmol/L Tris-HCI(pH8.4),200mmol/LKCl,15mmol/LMgC2。6仪器和设备6.1实时荧光PCR仪。6.2离心机：最大离心力16000g。6.3微量移液器：10L、100uL、200L、1000L。6.4冰箱：2一8，-20。6.5高压灭菌器。6.6核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.7pH计。6.8天平：感量0.01g。