SNT 1942.1-2007 进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法 第1部分：分离与计数方法.pdf

SN/T1942.1-2007成1：10的稀释液。固体检样用灭菌均质器，以8000r/minl0000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。6.3.1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL注人含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。6.3.1.3另取1ml,灭菌吸管，按.上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。6.3.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度。6.3.2增菌试验将1mL待检样品接种于布氏肉汤管内，每一稀释度接种三管，置36士1温箱内，培养24h2h。6.3.3分离培养将呈轻度浑浊有沉淀不形成菌膜的萌液直接途手血琼脂，肝浸液琼脂或布氏琼脂平板上，分别于微需氧(10%二氧化碳)和有氧条件下，置36+培家3d,然后跟出，按表1观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。表1布鲁氏菌属在不同培养基上菌落特征血琼脂群液液琼脂布氏琼脂形成微小、灰色不溶血菌落。形成无色，米适明网形表面光准形成无色、半透明、圆形，表面光滑、边象整齐中央用相、真拦约边缘整齐、中央稍凸起、直径约23的荣落，有时出现粘2mnm3mm的菌落。液样平燥的硬皮菌落6.3.4染色及镜检在上述平板上，挑取可疑菌落2个进革器氏染色并镜检，布鲁氏南属为草兰氏阴性球杆菌，无芽孢，无荚膜。6.3.5凝集试验（下述方法任选一种）6.3.5.1玻片凝集试验：取一个洁途的载玻片端滴1滴2鸿绳疫血清，另一端滴等量生理盐水，用接种环挑取分离可疑菌落，分别与测者混合调匀若血清端现片状或颗粒状凝集，生理盐水仍均匀浑浊，则试验为阳性，即可判定为珂凝布詹氏南将该南接种于寶浸液或胰蛋白胨琼脂斜面，做纯培养，用于进步鉴定。6.3.5.2试管凝集试验：本试验较玻片法淮确，而且可排除交义反应。取洁净的小凝集管8支，第一管加0.5%石炭酸生理盐水2.4mL,第管至第五管各加.。mL,第六、七管中不加人此生理盐水：用1m】移液管吸取被检血清0.1mL,加入第一管中，并反复吹吸三次，使血清和生理盐水充分混合均匀，然后吸出2.0mL,移入第二管0.5ml,剩余1.5mL弃去，如前法混合均匀后，吸出0.5mL.移入第三管0.5mL,依次类推到第四管，第四管混匀后吸出0.5mL弃去，然后各管如表2加入所需物质。置36土1恒温箱中4h6h,取出后放室温18h22h(36士124h也可)，观察结果。“十十十+”为液体完全透明，菌体完全被凝集，呈伞状，沉于管底，振荡时沉淀物呈片状、块状或颗粒状，即100%凝集。“+十+”为略浑浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡所见如上，即75%凝集。“+”为液体不甚透明，管底有明显凝集物沉淀，振荡见絮状物，约50%凝集。“+”液体更不透明，有不很显著凝集物沉淀，或仅有沉淀痕迹，约25%凝集。“一”液体浑浊，似有部分沉淀物，振荡立即浑浊。具体操作见表2。