SNT 2694-2010 牛胎儿毛滴虫检验方法.pdf

SN/T2694-20105.4裂解液（见附录A.4)。5.5酚/三氯甲烷/异戊醇25：24：1。5.63mol/L乙酸钠（见附录A.5)。5.7TE缓冲液。5.8阳性对照：由指定单位供应。6样品采集6.1公牛的阴茎包皮清洗液的采集公牛用六柱栏保定，用绳子固定采样侧的后肢，剪短阴筒外面的阴毛，用清水洗净公牛的尿道口，并用纸擦干。将采样管的采样端插人阴简内，将另一端的吸球压扁，用10L预热至35左右的生理盐水反复冲洗，吸取冲洗液。取出采样管，迅速将冲洗液注入无菌15L离心管中。将采样管放入消毒液中。冲洗液静置15min20min,用一次性吸管吸取底部液体1mL,分别注入两瓶TFTM中，0.5mL/瓶。1837条件下，尽快送至实验室。6.2母牛的生殖道清洗液、阴道粘液的采集母牛六柱栏保定，用清水洗净牛的外阴部，将采样管的采样端插入阴道内，用10mL预热至35左右的生理盐水冲洗，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取阴道粘液。取出采样管，迅速将冲洗液注入无菌15mL离心管中。将采样管放入消毒液中。冲洗液静置15min20min,用一次性吸管吸取底部液体1mL,分别注入两瓶TFTM中，0.5mL/瓶。1837条件下，尽快送至实验室。6.3流产的胎儿样品采集无菌采取胎儿的胃内容物1mL,0.5mL/瓶，分别注入两瓶TFTM中，1837条件下，尽快送至实验室。6.4精液的采集人工采集的新鲜或冷冻精液，取1mL置2瓶TFTM中，0.5mL/瓶。尽快送至实验室。7虫体的培养与镜检7.1样品送至实验室后，立即对样品进行离心，2500r/min,离心10min,不弃上清液，无菌从管底取1滴2滴沉淀物至载玻片上，不盖盖玻片，10镜下观察。7.2如未发现虫体，另取2滴3滴沉淀物接种到含l0 mL Diamond培养基的试管中。接种时，应将沉淀物接种在培养液的上层近液面处。37培养7d。7.3分别在第2、4、5、7天从管底部取一滴检查。检查方法同7.1。7.4发现虫体后，推荐用吉姆萨染液染色后观察。将待检样品取一滴，置于载玻片一端，用另一片载玻片推成薄膜，室温下干燥，用甲醇固定2min,将载玻片浸入含吉姆萨染色液的染色缸中，染色30min。取出后，吸干多余染液，在40倍物镜下观察。8虫体的鉴定8.1形态学鉴定胎儿毛滴虫是一种有鞭毛、呈梨状的真核原生动物。具有三根前鞭毛、一根后鞭毛和波动膜，体长约8ml8m、宽4m94m,呈活泼的蛇形运动。虫体前半部有核，有1个不易观察到的胞质体2