SNT 1204-2016 植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T1 2 0 42 0 1 6代替S N/T1 2 0 42 0 0 3植物及其加工产品中转基因成分实时荧光P C R定性检验方法P r o t o c o l o f t h e r e a l-t i m eP C Rm e t h o df o rd e t e c t i n gg e n e t i c a l l ym o d i f i e dp l a n t sa n dt h e i rd e r i v e dp r o d u c t s2 0 1 6-0 6-2 8发布2 0 1 7-0 2-0 1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准植物及其加工产品中转基因成分实时荧光P C R定性检验方法S N/T1 2 0 42 0 1 6*中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲2号(1 0 0 0 2 9)北京市西城区三里河北街1 6号(1 0 0 0 4 5)网址:www.s p c.o r g.c n服务热线:4 0 0-1 6 8-0 0 1 02 0 1 7年1 0月第一版*书号:1 5 5 0 6 62-3 1 3 2 5标准号：SN/T 1204-2016购买者：烟台富美特食品科技有限公司订单号：0100180131015055防伪号：2018-0131-0351-0278-7444时间：2018-01-31定价：32元中国标准在线服务网http:/前 言 本标准按照G B/T1.12 0 0 9给出的规则起草。本标准代替S N/T1 2 0 42 0 0 3 植物及其加工产品中转基因成分实时荧光P C R定性检验方法。本标准与S N/T1 2 0 42 0 0 3相比,主要修改如下:增加了植物内源基因的检测方法。增加了转基因植物筛选基因的检测方法。增加了大豆、玉米、油菜、棉花、水稻、马铃薯、亚麻、甜菜等作物的品系特异性检测方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局,深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人:黄新、朱水芳、高宏伟、李想、潘良文、陈洪俊、陈枝楠。本标准所代替标准历次版本发布情况为:S N/T1 2 0 42 0 0 3。S N/T1 2 0 42 0 1 6植物及其加工产品中转基因成分实时荧光P C R定性检验方法1 范围本标准规定了植物及其加工产品中转基因成分筛选和品系鉴定实时荧光P C R检测方法。本标准适用于大豆、玉米、油菜籽、水稻、棉花、马铃薯、亚麻、甜菜、苜蓿、番茄、木瓜、苹果、菊苣、剪股颖、烟草、李子、甜瓜、小麦、茄子和桉树转基因筛选检测,也适用于大豆、玉米、油菜、水稻、棉花、马铃薯、亚麻和甜菜等作物的品系特异性实时荧光P C R检验。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法G B/T1 9 4 9 5.2 转基因产品检测 实验室技术要求G B/T1 9 4 9 5.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法G B/T1 9 4 9 5.7 转基因产品检测抽样和制样方法G B/T2 7 4 0 3 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测3 术语、定义和缩略语3.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1转基因 t r a n s g e n e将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能D NA序列,通过生物工程技术,使其在该物种中进行表达,以便使该物种获得新的品种特征。3.1.2实时荧光P C R r e a l-t i m ep o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个P C R进程,荧光信号的强弱直接反映模板数量。3.1.3内源基因 e n d o g e n o u s g e n e在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。3.1.4外源基因 e x o g e n o u s g e n e利用生物工程技术转入的其他生物基因,使该生物品种表现新的生物学性状。1S N/T1 2 0 42 0 1 63.1.5C t值c y c l e t h r e s h o l d每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。3.2 缩略语下列缩略语适用于本文件。C T A B:十六烷基三甲基溴化铵(c e t y l t r i t h y l a mm o n i u mb r o m i d e)d AT P:脱氧腺苷三磷酸(d e o x y a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t e)d C T P:脱氧胞苷三磷酸(d e o x y c y t i d i n e t r i p h o s p h a t e)d G T P:脱氧鸟苷三磷酸(d e o x y g u a n o s i n e t r i p h o s p h a t e)D NA:脱氧核糖核酸(d e o x y r i b o n u c l e i ca c i d)d NT P:脱氧核苷三磷酸(d e o x y r i b o n u c l e o s i d e t r i p h o s p h a t e)d UT P:脱氧尿苷三磷酸(d e o x y u r i d i n e t r i p h o s p h a t e)E D T A:乙二胺四乙酸(e t h y l e n ed i a m i n e t e t r a a c e t i ca c i d)b p:碱基对(b a s ep a i r)T r i s:三(羟甲基)氨基甲烷(t r i s(h y d r o x y m e t h y l)a m i n o m e t h a n e)UD G:尿嘧啶D NA-糖基酶(u r a c i lD NAg l y c o s y l a s e)UNG酶:尿嘧啶-N-糖基化酶(u r a c i l-N-g l y c o s y l a s e)P C R:聚合酶链式反应(p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n)S D S:十二烷基磺酸钠(s o d i u md o d e c y l s u l f a t e)T a q:D NA聚合酶(T a qD NAp o l y m e r a s e)T E:T r i s-HC l、E D T A缓冲液P E 3-P E P c a s e:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(P h o s p h o e n i l p y r u v a t e-C a r b o x y l a s e)t R NA L e u:植物叶绿体基因B A R NA S E:来 源 于 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 的 核 糖 核 酸 酶 基 因(r i b o n u c l e a s eg e n ef r o mB a c i l l u sa m y l o l i q u e f a c i e n s)B A R S T A R:来源于解淀粉芽孢杆菌的B A R NA S E基因的特异抑制基因(s p e c i f i c i n h i b i t o ro f t h eb a r n a s eg e n e f r o mB a c i l l u sa m y l o l i q u e f a c i e n s)B X N:来源于肺炎克雷伯杆菌臭鼻亚种的腈水解酶基因(n i t r i l a s ee n z y m eg e n ef r o mK l e b s i e l l ap n e u m o n i a e s u b s p.O z a e n a e)C r y I A(b):苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白c r y I A(b)基因(As y n t h e t i cg e n ee n c o d e st h ef i r s t6 4 8a m i n oa c i d s,i n s e c t i c i d a l-a c t i v ef t r u n c a t e dp r o d u c ti d e n t i c a lt ot h a to fc r yI A(b)g e n eo fB a c i l l u st h u r i n g i e n s i ss u b s p)1 8 s r R NA:真核生物1 8 s核糖体R NA基因HMG I/Y:高移动性蛋白家族基因(H i g hm o b i l i t yg r o u pp r o t e i ng e n e)P E P:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(p h o s p h o e n o l p y r u v a t ec a r b o x y l a s eg e n e)C r u A:油菜种子储藏蛋白基因(C r u c i f e r i nAg e n e)a d h l:乙醇脱氢酶(a l c o h o l d e h y d r o g e n a s e)z S S I I b:编码玉米淀粉合酶异构体z S T S I I-2的基因(z e i ns t a r c hs y n t h a s e,g r a n u l e-b o u n ds t a r c hs y n t h a s e)L e c t i n:植物凝集素基因L AT 5 2:番茄花药(粉)特异性表达基因S P S:蔗糖合成酶(s u c r o s ep h o s p h a t es y n t h a s e)2S N/T1 2 0 42 0 1 6P L D:磷脂酶D家族基因(p h o s p h o l i p a s eDf a m i l y)GO X:草甘膦氧化还原酶基因(g l y p h o s a t eo x i d o r e d u c t a s eg e n e)UG P a s e:尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UD P-g l u c o s ep y r o p h o s p h o r y l a s e(c y t o p l a s m m a r k e r)S AH 7:陆地棉的S AH 7基因(S AH 7p r o t e i ng e n eo fG o s s y p i u m h i r s u t u m)G L u A 3:大米谷蛋白基因(r i c eG l u t e l i nG e n e)GAG 5 6:一种醇溶蛋白基因(o n eo f-g l i a d i ng e n e s)Wx 0 1 2:编码小麦蜡质基因(W a x yw h e a tg e n e s)A l f a l f a-A c c:(苜蓿乙酰辅酶a羧化酶)A l f a l f aA c e t y l-C o Ac a r b o x y l a s ep C a MV3 5 S:花椰菜花叶病毒3 5 S启动子(3 5 Sp r o m o t e r f r o mc a u l i f l o w e rm o s a i cv i r u s)p FMV3 5 S:玄参花叶病毒3 5 S启动子(3 5 Sp r o m o t e r f r o mam o d i f i e df i g w o r