GBT 7628-2008 谷物中维生素B1测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T7628-2008代 替GB/T76281987谷物中维生素B1测定De t e r Il n i n a t i o o f v i t a l i u B1i c e r e a szOOB-05-27发布2008-10-01 男:白 色甬 严 嫦 齄 氅 旱 嬲垦发 布GB/T7s 28-2008曰本 标 准 参 考 了AACC Me t h o d 868砜Th i a m i e Th i o c h r o m e Me t h o d(z O00年英 文 版)。本标准是对GB/T76281987谷物维生紊B浏定方法 的修订。本标准与GB/T76z B-19留的主要差异如下:规定了实验用水应符合GB/T66Bz 中三级水的规格,规定了扦样、分样方法,盐酸水解改为硫酸水解,增加了硅酸盐离子交换树脂的使用,将正丁醇溶剂改为异丁醉溶剂;提取液色泽浅、无干扰物质时,不箫进行提纯步骤;取消以干基计算测定结果的要求;增加了未通过提纯的试样中维生素Bl 含量的计箅公式;增加了谷饧中维生素Bl 低含量时的澍定重复性的要求。本标准由国家稂食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家稂食局武汉稂油饲料质量监督检验中心。本标准主要起草人:杨林、刘小敏、屈利文、何-帆、钱防。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/T76281987。前GB/T7628-2008谷物 中维生素B1测定1 范围本标准规定了用荧光分光光度计测定谷物中维生素Bl 的原理、试剂和材料、仪器设备、试样制备、分析步骤、结果计算及重复性。本标准适用于谷物中维生素Bl 的测定。本标准检出限为005u g。2 规范性引用文件下列文仵 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期 的引用文件,其 随后所有的修改单(不 包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然 而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件 的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB5491 粮食、油料检验 扦样、分样法G B/T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法(G B/T 6 6 8 2 1 9 9 2,n c q I s o 3 6 9 6:1 9 8 7)3 原理试样经稀硫酸、淀粉酶分解后,溶液中维生紊Bl(硫胺素,C】z H17ON4s CI)在碱性条件下被铁氰化钾氧化生成硫色素,即荧光色素。硫色素在异丁醇中的荧光强度与试样 中维生素B】的含量成正 比,依 此测定维生素B】含量.4 试剂和材料除另有规定外,所用试剂均为分析纯,实 验用水应符合GB/T6682中三级水的规格。41 盐酸4 2 乙酸钠溶液c(C H 3 C o o N D=2.5 m o l/L取2 0 5 g 无水乙酸钠或3 4 0 g 水合乙酸钠(C H a C o o N a 3 H 2 0)溶于水中,稀释至1 0 0 0 m L。43 乙酸溶液c(CH3Co o H)=3%(体积分数)取3 0 mL 冰乙酸用水稀释至1 0 0 0 mL.44“化钾溶液c(KCI)=0.25g/m【称取250g 氯化钾溶解于水 中,稀 释至1000m L。4 5 硝酸银溶液c(A gN O a)=0.0 1 g/mL称取1g 硝酸银溶解于水 中,稀 释至 100m L。4,6 淀粉酶悬浮液c=0.0 6 g/m L取6g 淀粉酶制剂(t a k a d Ia s t a),其 活性为1:250或相 当活性 的其他磷酸酯晦,用 2.5m l/L乙酸钠溶液(42)制成悬浮液,稀释至100m L,当日制备当 日使用。47 硅酸盐离子交换剂47.1 活性沸石将沸石按规定筛层 进行 筛选,称 取通过 上层 筛(孑 L径 0297m m,5o 目)、留存 在下 层筛(孑 1径 o.177m m,80目)上 的沸石100g 于布氏漏斗中,用 3%的热乙酸(改 3,约 50)溶 液洗涤15m i n,应使乙酸与沸石保持接 触10m i n 15m i n,用真 空泵减 压抽 滤 乙酸,再 用025g/m L的热 氯化 钾 溶 液(4.4,约50)250m L进行洗涤;最后用热水(约 50)洗 涤,直 至洗 出液用硝酸银(4.5)检查时不 出现1GB/T7628-2008氯离子。在室温或低于100烘箱中将沸石干燥后,在干燥器中冷却至室温,储存于磨口瓶中备用。4.7,2 硅酸盐离子交换树脂,o R e x,0(H 型)将硅酸盐离子交换树脂按规定筛层进行筛选,称取通过上层筛(孑1 径 0 2 9 7 m m,5 o 目)、留存在下层筛(孔径 0.1 4 9 m m,1 0 0 目)上的硅酸盐离子交换树脂5 0 g,加人3 0 0 m L 盐酸(4,D,振摇1 0 m i n 1 5 m i n,将酸倒出,再加3 0 0 m L 水,振播1 m l n,将水倒出。重复数次,直至树脂的p H 为改5 7.0,抽滤或离心除去多余的水分,冷藏储存(4)。当时使用,可以不除去多余的水分。4.8 氢筑化钠溶液(N aoH)=0,ls g/mL将15g 氢氧化钠溶于水中,冷却,稀释至4.9 铁“化钾溶液c匚K 3 F e(C N)s彐=将1g 铁氰化钾溶于水中,阴凉处倮存。4.10 孩性铁原化钾取0。0 1 g/m L 铁佤化8)稀释定容至 100m L,现配现用。也可以按每配制。4.异丁醇匚(CH3)2空 白荧光值应低将异丁醇在全玻璃仪器上蒸馏,或加4.12 硫胺素溶液4.12.1 磙胺素将硫胺素溶于25%乙醇(4.14)中,并用4.12.2 磙胺素淮确量取54.123 硫胺素准确量取4配现用。100m L。至1 0 0 mL,现4.13 硫酸奎宁溶4.1 3.1 硫酸奎精确称取100稀释至1 0 0 O mL,储存于棕色瓶中冷藏保4.13.2 硫酸奎宁工作准确量取3m L硫酸奎1 0 0 0 mL,储存于棕色瓶中冷藏保存。4.l 0 乙醇溶液z s%(体积分数)将25m L无水 乙醇加人到水 中,4.1 5 硫酸溶液c(2 H 2 s o。)=0,1 m d/L将2.8m L浓硫酸加人到水中,稀释定容至 1000m L。5 仪器设备5.1 荧光分光光度计。5.2 电热恒温水浴:100。5.3 实验室用真空泵。5.4 电热恒温箱:3 7 4 o。5.5 吸附分离柱(见 图1):容器全长约235m m,上端储液槽(外 径长度)30m m 70m m,容量为50m L;中部吸附管(夕卜 径长度)8m m 130m m;下端为35m m 的毛细管,其孔径在液体通过时的流23 mL,用0 1 5 g/mL 氢氧化钠溶液(4.8)加 人 1滴铁氰化钾溶液(I)精确称取(4),可()c(1姓)稀 释溶液()13D,用01m l/L硫酸(至1 0 0 mL,摇量应控 制在不 大 于1m L/m i n。56 反应管(见 图2):25m L具塞 刻度 玻璃试 管。单位为毫米分析天平2实验磨。容量瓶:1移液管:注射器:金属丝离心机:干燥器。6 试样制备6 1 亡良GB54916.2 粒状样品:63 粉状样品:混匀;如有适 当方法充分混匀。7 分祈步骤7.1 称样根据试样 中硫胺素含量,按表15.7585.95.105115.125.135 14GB/T7628-2008单位为毫米当方法充分混匀。或其他适当方法充分),再 用混样器或其他,置于100m L容量瓶中。尻m o.149m 幅(粉碎,过孔径叻 o表1 试样旦及样液体积试样 中硫胺素含量(X)/(m g/k g)试样量()/g加人到离子交换柱 的样液体积(V)/m L收集洗脱液体积()/m Lo 1 141 3-3 83红 0 6 626 8 13 2113 4 22.0122.244 015衽4以上12硫胺紊标准工作液3GB/T7628-200872 提取加人0.1m l/L硫酸(415)50m L到容量瓶(7.D中,在 100电热恒温水浴 中加热10m i n,并不时摇动容量瓶,以 防结块。7.3 酶解冷却容量瓶(7,2)至40 以下,加人 5m L淀粉酶悬浮液(4.6),充分混匀,在 37 硐温度环境中至少放置4h,冷却至室温,用水稀释定容至100m L,摇匀,将试液通过滤纸干过滤,弃去最初 的5m L滤液后再收集滤液于锥形瓶 中,作为样品提取液。如提取液色泽浅、无干扰物质时,不需进行提纯步骤,按 7.6进行氧化操作。测定结果按第8章的式 1)计箅。7.4 净化7.4.1 当提取液色泽很深或含有干扰物质时,按 7.42、7。43、7.4,姓的步骤净化,测 定结杲按第8章的式(2)计 算。7.4.2 取适量玻璃棉置于吸附分离柱吸附管底部,然 后将05g 活性沸石(4.7.D或制备好 的硅 酸盐离子交换树脂(4.7,2)放人吸附管,在使用前用沸水充分洗涤吸附分离柱。7.4.3 准确移取适量体积E见 表1(V)彐的样液,加人到已处理好 的吸附分离柱 中(吸 附剂应保持被沸水完全浸泡),用 5m L热水(约 50)洗 涤吸附分离柱,连续操作三次,弃 去洗出液,以 确保硫胺 素在柱上分配完全。7.4.4 取适量煮沸的025g/m L氨化钾溶液(准 4),分 三次连续加人吸附分离柱,用 25m L具塞刻度玻璃试管收集洗脱液,收集的洗脱液体积匚 见表1(V2).冷却后用水稀释定容至 25m L,充分混匀。7.5 外标溶液准确吸取25m L硫胺素标准工作液(4123),重复7.1 73操作,作为外标溶液。7.6 氧化分别准确移取5m L样液(7.3)或洗脱液(74.3)于两只具塞离心试管 中,编 为1号试管 和2号试管。在1号具塞离心试管中,加人 3m L碱性铁氰化钾溶液(4.10),在2号具塞离心试管 中加人 3m Lo,15g/m L氢氧化钠溶液(4.8),振摇约30s;再分别准确加人15m L异丁醇(4.11),剧烈振摇1m i n。将1号、2号具塞离心试管置于离心机 中以 1g OO r/m i n 的速度离心1m In 后,用注射器吸去水层,在异丁醇层 中加人1m L无水乙醇,混匀。|77 测定 7,7.1 调整荧光分光光度计用硫酸奎宁工作液(4,13.2)调整荧光分光光度计,使其处于正常工作状态。7.7.2 浏定样液的荧光强度将10m L异丁醇层倒人 比色杯中,于激发波长365n m、发射波长435n m 处测定硫胺素的荧光值,分别记录1号试管试液的荧光值R和2号试管试液空 白的荧光值R玷。同时分别准确吸取5m L外标溶液(75)置人另两只具塞离心试管 中,编 为3号和4号(作 为标准空 白),按 76操作后,测定3号试管的硫胺素标准工作溶液(4123)的荧光值R每和4号试管 的硫胺素标准工作溶液空 白的荧光值Rb。8 结果计箅未经过提纯 的试样 中维生素B1含量(X1)按式(1)计 箅,经过提纯 的试样 中维生紊Bl 含量(X2)按式(2)计箅:凡=螂“1)4屁=(Rx-Rb)V蚝 cGB/T7628-2008 (2)(R,R山 V】X式中:Xl 未经过提纯的试样中维生紊B!含量,单位为皂克每千克(m g/k g);X:经过提纯的试样中缑生素Bl 含量,单位为毫克每千克(m g/k g),R:1号管试液的荧光值;R山2号管试液空白的荧光值,R:3号管硫胺素标准工作溶液的荧光值;R-4号管碗胺亲标准工作溶液空白的荧光值;Vl 分取过离子交换柱样液的体积,单位为毫升(m L),%收集洗脱液体积,单位为毫升 m L);试样质迳,革位为克(g);V薛解提取液的体积,单位为毫升(m L);c 硫胺素标准工作溶液的浓度,单位为微克每亳升(u g/l n L);X。参与反应样品溶液体积与参与反应标准溶液体积的比值(通常5/5=D。每个试样进行平行试验,以算术平均值为测定结果。计箅结果保留3位有效数字。9 工复性同-分柝者对同一试样在同样条件下同时进行两次测定:当维生素B!含量