GBT 8381.7-2005 饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法.pdf

I CS 6 5.1 2 0B 4 6谊黔中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T 8 3 8 1.7-2 0 0 5饲料中哇乙醇的测定高效液相色谱法 D e t e r m i n a t i o n o f o l a q u i n d o x i n f e e d-H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y2 0 0 5-0 9-0 5发布2 0 0 6-0 2-0 1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会发 布GB/T 8 3 8 1.7-2 0 0 5前言 本标准是在参阅了美国公职分析化学家协会(A O AC)方法及国内外大量文献基础上，根据我国技术发展水平研究制定的。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:农业部饲料工业中心。本标准参加起草单位:国家饲料工程技术研究中心、国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:李德发、杨文军、张丽英、王凤来、李兰。GB/T 8 3 81.7-2 0 0 5饲料中哇乙醇的测定高效液相色谱法范 围本标准规定了以高效液相色谱(HP L C)测定饲料中哇乙醇的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中喳乙醇的测定，检出限为 Zm g/k g,2规范性 引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日 期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日 期的引用文件，其最新版本适用于本标准口 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B/T 1 4 6 9 9.1 饲料采样3原理 饲料样品中的喳乙醇以甲醇溶液提取，过滤后用反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定 量分析。4试荆和材料 本标准所用试剂，除特别注 明外，均为分析纯。水为蒸馏水，色谱 用水为去离 子水，符合GB/T 6 6 8 2用水的规定。4.1 乙酸4.2 提取液:5%甲醇(色谱纯)溶液。4.3 流动相:1 5%甲醇(色谱纯)溶液(用乙酸调p H2.8),4.4 喳乙醇标准溶液4.4.1 哇乙醇标准储备液:准确称取喳乙醇标准品。.0 5 0 2 0 g(含量大于等于9 9.6%，使用前于 1 0 5 0 C烘箱中干燥 2 h,贮存于硅胶干燥器中)，精确至。.0 1 mg，置于 5 0 mL棕色容量瓶中，用提取液(4.2)在6 0 超声波水浴超声振荡 1 5 m i n溶解并定容至刻度，摇匀，其溶液浓度为 1 mg/ml，贮于 4 0C-6 冰箱中，有效期为 1 周。4.4.2 哇乙醇标准工作液:分别用吸管准确移取合适体积的 1.0 m g/mL的储备液(4.4.1)，置于1 0 m 1,棕色容量瓶中，用提取液(4.2)稀释至刻度，配制成 1 0.0,2 0.0,4 0.0,6 0.0,8 0.0,1 0 0.0 p g/m L标准工作 液。5 仪器、设备离心机:3 0 0 0 r/mi n e超声波振荡器。微孔滤膜(孔径0.4 5 K m),p H计:精度0.0 1 m V恒温振荡器:3 0 0 r/m i n,分析天平:感量。1 m g,分析天平:感量。.0 1 m g,1门乙J55月暇口U:.5.7G B/T 8 3 8 1.7-2 0 0 55.8 高效液相色谱仪。试样的制备 按 G B/T 1 4 6 9 9.1 的规定选取有代表性样品2 0 0 g-5 0 0 g，用四分法缩至 1 0 0 g，粉碎通过0.4 5 mm孔径筛，充分混匀 贮于磨口瓶中备用。分析步骤7.1 准确称取 5.0 g配合饲料(浓缩饲料 3.0 g，预混合饲料 1.0 g)试样，置于具塞锥形瓶中，加人0.5 g 碳酸钾和 5 0 mL提取液(4.2)，具塞置于摇床中，恒温振荡器(5.5)振荡速度 1 1 0 r/m i n,振荡3 0 mi n(避光操作)。7.2 将试样提取液(7.1)倒人离心管，3 0 0 0 r/m i n 离心1 5 m i n,7.3 取离心上清液(7.2)用。.4 5 p m滤膜过滤，滤液作为试样溶液。7.4 H P L C测定参数的设定:分析柱:LIB，柱长 2 5 0 m m，内径 4.6 mm,粒度 5 P m(或类似分析柱)。柱温:室温。检测器:紫外检测器，检测波长2 6 0 n m,流动 相速度:。.9 m l,/m i n,进样量;1 0川。7.5 HP LC测定 取适量试样溶液(7.3)和相应浓度的标准工作溶液(4.4.2)，做多点校准，以色谱峰面积积分值定量。结果计算与表述8.1 试样中喳乙醇的含量X以质量分数(m g/k g)表示，按式(1)计算。X=竺 X 5 0 ，.，.，(1)式中:m试样色谱峰对应的喳乙醇质量，单位为微克(!1 g)+二 试样质量，单位为克(9);5 0-稀释倍数。8.2 测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后 1 位。重 复性在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于 7%0