GBT 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲 料 中 粗 蛋 白 测 定 方 法G B/T 6 4 3 2 一 9 4Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f c r u d e p r o t e i n i n f e e d s t u f f s代替 G B 6 4 3 2 一6 6 本标准参照采用I S O 5 9 8 3-1 9 7 9 动物饲料一 氮含量的测定和 粗蛋白 含量计算。主腼内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。引用标准G B 6 0 1 化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸钱。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用 砚酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.2 5，计算出粗蛋白含量。4 试剂4.1 硫酸(G B 6 2 5):化学纯，含量为 9 8%，无氮。4.2 混合催化剂:0.4 g 硫酸铜，5 个结晶水(G B 6 6 5),6 g 硫酸钾(H G 3-9 2 0)或硫酸钠(H G 3-9 0 8),均为化学纯，磨碎混匀。4.3 氢氧化钠(G B 6 2 9):化学纯，4 0%水溶液(M/V)o4.4 硼酸(G B 6 2 8):化学纯，2%水溶液(MY).4.5 混合指示剂:甲基红(H G 3-9 5 8)0.1%乙醇溶液，澳甲酚绿(H G 3-1 2 2 0)0.5%乙醉溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4.6 盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定，按G B 6 0 1 制备。4.6.1 0.1 m o l/L 盐酸(H C l)标准溶液:8.3 m L盐酸(G B 6 2 2)，分析纯，注入1 O O O M I蒸馏水中。4.6.2 0.0 2 m o l/L盐酸(H C l)标准溶液:1.6 7 m l,盐酸(G B 6 2 2)，分析纯，注入1 O O O m l蒸馏水中。4.7 蔗搪(H G 3-1 0 0 1):分析纯。4.8 硫酸钱(G B 1 3 9 6);分析纯，千燥。4.9 硼酸吸收液:I%硼酸水溶液1 O O O m L，加入。I 0 o 溟甲酚绿乙醇溶液 1 0 m L,0.1 写甲基红乙醇溶液7 m L,4%氢氧化钠水溶液。5 m L,混合，置阴凉处保存期为一个月(全自 动程序用)。5.1仪器设备 实验室用样品粉碎机或研钵。国家技米监督局1 9 9 4 一 0 7 一 1 8 批准1 9 9 5 一 0 1 一 0 1 实施GB/T 6 4 3 2 一 9 45.2 分样筛:孔径0.4 5 m m(4 0目)。5.3 分析天平:感量。，0 0 0 1 g e5.4 消煮炉或电炉5.5 滴定管:酸式，1 0,2 5 m L,5.6 凯氏 烧瓶:2 5 0 m L,5.7 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水燕气蒸馏式。5.8 锥形瓶:1 5 0,2 5 0 m L,5.9 容量瓶:1 0 0 m L,5.1 0 消煮管:2 5 0 m L.5.1，定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。6 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至2 0 0 g，粉碎后全部通过4 0目 筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。7 分析步蕊了.，仲裁法7.1.1 试样的消煮 称取试样。5-1 g(含氮量5 8 0 m g)准确至0.0 0 0 2 g，放入凯氏 烧瓶(5.6)中，加入6.4 g 混合催化剂(4.2)，与试样混合均匀，再加入1 2 m L硫酸(4.1)和2 粒玻璃珠，将凯氏烧瓶(5.6)置于电炉(5.4)上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(3 6 0 4 1 0)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2 h,7 门.2 氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A)7.1.2.1 常量蒸馏法 将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入6 0 -1 0 0 m L蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸入装有2 5 m L硼酸(4.4)吸收液和2 滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶内。然后小心 地向凯氏烧瓶(5.6)中加入5 0 m L氢氧化钠溶液(4.3)，轻轻摇动凯氏 烧瓶(5.6)，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为1 0 0 m L。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1-2 m i n，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏.71.2.2 半微量蒸馏法 将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入2 0 m L 燕馏水，转入1 0 0 m L容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为 试样分解液。将半微量蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸人装有2 0 m L 硼酸(4.4)吸收液和2 滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶(5.8)内。蒸汽发生器(5.7)的水中应加入甲 基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1 0-2 0 m L注入蒸馏装置(5.7)的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口 玻璃塞，再加1 0 m L氢氧化钠溶液(4.3)，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口 处加水密封，防止漏气。蒸馏4 m i n 降下锥形瓶(5.8)使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 m i n，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流人锥形瓶内，然后停止蒸馏。注:7.1.2.1 和7.1.2.2 燕馏法测定结果相近，可任选一种。7.1.2.3 蒸馏步骤的检验 精确称取。.2 g 硫酸钱(4.8)，代替试样，按7.1.2 或7.2.2 步骤进行操作，测得硫酸按含氮量为2 1.”士。.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。7.，.3 滴定G s/r 6 4 3 2 一 9 4用7.1.2.1 或7.1.2.2 法蒸馏后的吸收液立即用。.1 m o l/L(4.6.1)或0.0 2 m o l/l.(4.6.2)盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。7.27.2.1推荐法 试样的消煮 称取。.5-l g 试样(含氮量5 8 0 m g)准确至。.0 0 0 2 g,放入消化管中，加2 片消化片(仪器自 备)或6.4 g 混合催化剂(4.2),1 2 m l 硫酸(4.1)，于4 2 0 下在消煮炉上消化1 h。取出放凉后加入3 0 m l蒸馏水。7.2.2 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪(5.1 1)时，按仪器本身常量程序进行测定。采用半自 动定氮仪(5.1 1)时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以2 5 m L硼酸(4.4)为吸收液，加入2 滴混合指示剂(4.5),蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入5 0 m l氢氧化钠溶液(4.3)进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到 1 0 0 s n L时为宜。降下 锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。7.2.3 滴定 用。1 m o l/L的标准盐酸溶液(4.6.1)滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。8 空白测定 称取蔗糖0.5 g，代替试样，按第七章进行空白 测定，消 耗。.1 m o l/I 盐酸标准溶液(4.6.1)的体积不得超过。.2 m L,消耗0.0 2 m o l/L盐酸标准溶液(4.6.2)体积不得超过。.3 m L o9 分析结果的表述9.1式中计算见下式粗蛋白质(%)=(V，一 V,)XCX 0.0 1 40X 6.2 5 V,阴X V义 1 0 0V 滴定试样时所需标准酸溶液体积,m L;V 滴定空白时所需标准酸溶液体积,m L;C 一 一 盐酸标准溶液浓度，m o l/L;。试样质量,g;V 试样分解液总体积，m I;V 试样分解液蒸馏用体积，m L;。0 1 4。每毫克当量氮的克数;6.2 5-氮换算成蛋白 质的平均系数。9.2 重复性 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在2 5%以上时，允许相对偏差为1%0 当 粗蛋白 质含量在1 0%-2 5%之间时，允许相对偏差为2%a 当粗蛋白质含量在1 0%以下 时，允许相对偏差为3%0G B/r 6 4 3 2 一 9 4附加说明:本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责修订本标准起草人马东霞。