GBT 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定.pdf

GB/T5009.24-2003水层移于原量筒中，将上层石油醚溶液从分液漏斗上口倒出，弃去。再将量筒中溶液转移于原分液漏斗中。再重复用石油醚提取两次，每次30L,最后将量筒中溶液仍移于分液漏斗中。黄油样液总共用石油醚提取两次，每次40mL。6.2.2用三氯甲烷分配提取：于原量简中加人20L三氯甲烷，摇匀后，再倒入原分液漏斗中，振摇2mi。待分层后，将下层三氯甲烷移于原量筒中，再重复用三氯甲烷提取两次，每次10mL合并于原量筒中。弃去上层甲醇水溶液。6.2.3用水洗三氯甲烷层与浓缩制备：将合并后的三氯甲烷层倒回原分液漏斗中，加人30L氯化钠溶液(40g/L),振摇30$，静置。待上层混浊液有部分澄清时，即可将下层三氯甲烷层收集于原量筒中。加入10g无水硫酸钠，振摇放置澄清后，将此液经装有少许无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于100mL蒸发皿中。氯化钠水层用10mL三氯甲烷提取一次，并经过滤器一并滤于蒸发皿中。最后将无水硫酸钠也一起倒于滤纸上，用少量三氯甲烷洗量简与无水硫酸钠，也一并滤于蒸发皿中，于65水浴上通风挥干，用三氯甲烷将蒸发皿中残留物转移于浓缩管中，蒸发皿中残渣太多，则经滤纸滤人浓缩管中。于65用减压吹气法将此液浓缩至0.4L以下，再用少量三氯甲烷洗管壁后，浓缩定量至0.4mL备用。6.3测定6.3.1硅胶G薄层板的制备薄层板厚度为0.3mm,105话化2h,在干操器内可保存1d2d。6.3.2点板取5cm20cm的薄层板两块，距板下端3cm的基线上各滴加两点，在距第一与第二板的左边缘0.8cm1cm处各滴加104L黄曲霉毒素M,与B,混合标准使用液，在距各板左边缘2.8cm3cm处各滴加同一样液点（各种食品的滴加体积见表1），在第二板的第二点上再滴加10L黄曲霉毒素M与B,混合标准使用液。一般可将薄层板放在盛有干燥硅胶的层析槽内进行滴加，边加边用冷风机冷风吹干。6.3.3展开6.3.3.1横展：在槽内加入15mL事先用无水硫酸钠脱水的无水乙醚(500mL无水乙醚中加20g无水硫酸钠)。将薄层板靠近标准点的长边置于槽内，展至板端后，取出挥干，再同上继续展开一次。6.3.3.2纵展：将横展两次挥干后的薄层板再用异丙醇-丙酮-苯-正己烷-石油醚（沸程6090）-三氯甲烷(5+10+10+10+10+55)混合展开剂纵展至前沿距原点距离为10cm12cm取出挥千。6.3.3.3横展：将纵展挥干后的板再用乙醚横展1次2次，展开方法同6.3.3.1。6.3.4观察与评定结果6.3.4.1在紫外光灯下将第一、二板相互比较观察，若第二板的第二点在黄曲霉毒素M与B:标准点的相应处出现最低检出量(M与B,的比移值依次为0.25和0.43)，而在第一板相同位置上未出现荧光点，则试样中黄曲霉毒素M:与B含量在其所定的方法灵敏度以下（见表1）。6.3.4.2如果第一板的相同位置上出现黄曲霉毒素M与B,的荧光点，则第二板第二点的样液点是否各与滴加的标准点重叠，如果重叠，再进行以下的定量与确证试验。6.3.5稀释定量样液中的黄曲霉毒素M:与B,荧光点的荧光强度与黄曲霉毒素M:与B的最低检出量(0.0004g)的荧光强度一致，则牛乳、栋乳、牛乳粉、乳酪与黄油试样中黄曲霉毒素M与B,的含量依次为0.1、0.2、0.5、0.5及0.54g/kg;新鲜猪组织（肝、肾、血、瘦肉）试样均为0.2g/kg(见表1)。如样液中黄曲霉毒素M与B,的荧光强度比最低检出量强，则根据其强度逐一进行测定，估计减少滴加微升数或经稀释后再滴加不同微升数，直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致为止。6.3.6确证试验在做完定性或定量的薄层板上，将要确证的黄曲霉毒素M与B,的点用大头针圈出。喷以硫酸溶201