GBT 9826-1988 小麦粉破损淀粉测定法 α-淀粉酶法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准U D C 6 6 4.7 8 s 5 4 3.0 6小 麦 粉 破 损 淀 粉 测 定 法 a-淀 粉 酶 法GB 98 2 6 一 8 8f o r d e t e r m i n a t i o n o f s t a r c h d a m a g ef l o u r-Al p h a-a my l a s e me t h o d主面内容与适用范围本标准规定了用a-淀粉酶恻定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析的步骤以及结果计算。本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。2 方法原理 小麦粉中破损淀粉对 a 一 淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉，在常温下能被。淀粉酶降解生成栩精和一定量的还原搪。利用此特性，在规定的条件下，用a-淀粉酶降解小麦粉中破损淀粉，再用铁氛化钾法测定其还原搪量.并根据法兰德的经验公式计算小麦粉中的破扭淀粉值。3 试荆 以下试剂未经标明的均为分析纯试剂，水为蒸馏水。3.1 缓冲溶液 溶解4.1 g 无水乙酸钠于水中.加入3 m l,冰乙酸，再用水稀释至1 0 0 0 m L,p H值应为4.7 士。.1.3.2 提取溶液 将2 0 g 氯化钠及0.2 g 乙酸钙溶于水中，再稀释至1 0 0 0 m L,3.3 a-淀粉酶液 称取活性相当于1 5 0 0 0 士1 5 0 0 A的a-淀粉醉制荆溶于5 0 0 m l,提取液中，再加人5 0 0 m l,缓冲液,a-淀粉酶活性测定见附录A 补充件)a-淀粉醉活性测定。此溶液用时现配。3.4 1 0 0 a(V/V)硫酸溶液。3.5 1 2%钨酸钠溶液.3.e 0.1 M碱性铁氛化钾溶液 称取3 2.9 g 干燥纯净的铁氛化钾与4 4.0 无水碳酸钠溶于1 0 0 0 m L 水中，贮于棕色瓶避光保存。3.了 乙酸盐溶液 7 0 g 抓化钾和4 0 g 硫酸锌溶于水中，加入2 0 0 m l,冰乙酸，再用水稀释至1 0 0 0 m L,3.8 1 0 Y,碘化钾溶液。3.9 1%淀粉溶液。3.1 0 0.1 M硫代硫酸钠溶液 称取2 4.8 2 g 硫代硫酸钠(含5 个结晶水)和3.8 g 四翻酸钠溶于1 0 0 0 m l,水中，贮于棕色瓶避光保存，一星期后按G B 5 4 9 0 粮食、油料和植物油脂枪验一般规则 附录B 规定方法标定其浓度。中华人民共和国商业部1 9 8 8 一 0 7 一 0 6 批准1 9 8 9-0 3-0 1 实施G B 9 8 2 6 一 8 83.1 1 酸洗石英砂4 仪器和用具4.1 玻璃试管:0 2 5 X2 2 0 m m,4.2 量筒:5 0 m L;2 5 m L.4.3 恒温水浴:可控温3 0 士0.1 C。4.4 秒表。4.5 加液器或移液管:2 m L;1 0 m L.4.6 移液管:5 m L,4.了 玻璃漏斗及中速滤纸。4.8 电炉。4,9 锥形瓶:1 0 0 m L,4.1 0 滴定管,1 0 m L,4.1 1 天平:感量0.0 1 g;0.1 m g,4.1 2 p H计或精密p H试纸:可测p H 4.7 土0.1,5 分析步驻51 称样量 一般小麦粉均假定其水分含量为1 4.0%,淀粉含量为6 8 Yo-7 2%，称样量为1.0 0 1 0.0 1 g。如果淀粉含量过高或过低时，则称祥量应按式(1)计算:称 样 量(;)一 行 7 0.，.，.(:)气沙0 r2 粗 少式中:P-1 0 0 M 一 一 1 0 0试样中蛋白 质的克数(含氮量X 5.7);试样中水分的克数。5.2 酶解 称取5.1 规定量的试样于玻璃试管中，加入1 小勺酸洗石英砂，混匀并将试样摇松倾斜于试管底部，准确量取4 6 m L已预热至3 0 的二淀粉酶液，先将少许，淀粉酶液加入试样中并尽量摇匀，立即计时，再加入其余 a-淀粉醛液，加盖试管井上下颠倒摇动约3 0 次使试样均匀悬浮。迅速将试管浸入3 0 水浴中，然后每隔1 0 m i n 取出试管，上下颠倒摇动1 0 次使试样重新均匀悬浮，恒温酶解刚好6 0 m i n 时，取出试管，立即加入2 m L 1 0%硫酸溶液，充分混匀后，再加人2 m L1 2%钨酸钠溶液，摇匀并放置约2 m i n 后，用中 速滤纸过滤。充去最初几滴，收集沈液于干净锥形瓶中，此滚液即为试样测定液。另取一支试管不加小麦粉试样，同时同上操作，所得滤液即为空白 对照液。5.3 测定还原糖 准确吸取5 m L 试样液于试管中，再准确加入1 0 m L 0.1 M碱性铁佩化钾溶液，混合后将试管浸入剧烈沸腾的水中(可将试管置子铁丝笼架放人铝锅煮沸的水中，每次可同时作多个样品的测定)，继续加热待水再沸腾后开始计时，准确反应2 0 m i n 后，取出试管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶中，并用2 5 m L乙酸盐溶液分三次洗涤试管一并倒人锥形瓶内，再加入1 0 m L 1 0%碘化钾溶液。然后用0.1 M 硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，再加人约1 m L1%淀粉液，继续滴定至溶液蓝色消失(半分钟内溶液不返蓝色)，记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V,(m L),吸取空白对照液5 m L 代替试样液，同上操作，记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V 2(m L),G B 9 8 2 6 一 8 86 结果计算6.1 氧化5 m L 样品液(相当于0.1 g 小麦粉样品)中还原糖所需0.1 M铁氰化钾体积V 按式(2)计算V 一(V z-V,)X 击(2)式中:V-氧化试样液中还原搪所需的0.1 M铁氰化钾液的体积,m L;V,滴定试样液用去硫代硫酸钠的体积,m L;v Z 滴定空白液用去硫代硫酸钠的体积,m L;c-硫代硫酸钠的摩尔浓度，M;0.1 换算成0.1 M铁佩化钾溶液体积的系数。6.2 小麦粉麦芽糖值的确定 根据式(2)计算所得V 值在表1 中用插人法查出相应的1 0 0 g 小麦粉中含有麦芽糖的克数，即为该样品的麦芽糖值 L o 表 1 小麦破损淀粉的麦芽搪值换算表被还原的 0.1M铁氛化钾 mL每1 0 0 g 面粉麦芽糖值 目一 i t ifi I II m w f1G m L每1 0 0 g 面粉麦芽糖值 8 擎IK M 铁 佩 化 钾lmL每1 0 0 g 面粉麦芽掩值 8一 1 1 1 铁 m L每1 0 0 g 面粉麦芽塘值 89.99.89.79.右9.59.49.39.29.19.08.98.88.78.68.58.48.38.28.18.07.97.87.77.67.55.1 86.0 85.9 85.8 85.7 85.6 85.5 85.5 05.4 25.3 45.2 75.1 95.1 25.0 54.9 94.9 24.8 54.7 84.7 24.6 54.5 84.514.4 54.3 84.3 1一4.2 54.1 84.1 24.0 63.9 83.9 23.8 53.7 93.7 33.6 73.6 03.5 33.4 73.4 13.3 43.2 83.223.1 53.0 83.0 22.9 52.8 82.8 22.7 62.7 0一2.642.572.5 12.4 42.3 72.3 12.2 52.1 82.1 32.0 72.0 11.9 51.8 81.8 21.7 61.7 11.6 61.6 11.5 61.5 11.4 51.4 01.351.3 01.2 62.42.32.22.12.01.91.81.71.61.51.41.31.21.11.00.90.90.70。60.50.40.30.20.11.211.1 61.1 11.0 61.0 10.9 60.9 00.850.8 00.7 60.710.6 50.5 00.5 60.5 10.4 60.4 10.3 60.3 10.2 50.2 00.1 50.1 00.5 03 5 7G B 9 8 2 6 一 8 86.3 小麦粉破损淀粉值(P)按式(3)计算尸=(5 X L一 3.5)X 6 ”(3)式中:L 一一小麦粉麦芽糖值。7 结果允许差两次测定结果之差不得超过平均值的5%,测定结果保留小数点后一位。0B 9 8 26 一 8 8 附录A。一 淀粉酶活性的测定 (补充件)主题内容和适用范围本补充件规定了用比色法测定，淀粉酶活性的方法。本补充件适用于各种来源的a-淀粉酶制剂及谷类产品的。一 淀粉酶活性的测定。方法原理a-淀粉酶能降解0-限制枷精，经过不同的反应时间后，反应棍合物与碘的显色强度随时间增加而降低，用测定这种显色强度随时间降低的速度来反映a-淀粉酶的活性。A 3 试剂以下试剂未经标明的均为分析纯，水为蒸馏水。A 3.1 0.2%氯化钙溶液。A 3.2 碘贮备液 溶解1 1.0 g 碘化钾于少量水中，加入5.5 g 结晶碘，搅拌至碘完全溶解，再稀释至2 5 0 m L,置棕色瓶中贮于暗处。此液可保存一个月。A 3.3 碘稀释液 溶解4 0.0 g 碘化钾于水中，加入4.0 m L 碘贮备液，用水稀释至1 0 0 0 m L，用时现配。A 3.4 缓冲溶液 溶解1 6 4 g 无水乙酸钠或2 7 2 g 三水乙酸钠(C H Z C O O N a 3 H 2 0)于水中，加人1 2 0 m L 冰乙酸，用水稀释至1 0 0 0 m L.A 3.5 可溶性淀粉。A 3.6 0-淀粉酶液 取1 0 g 具有酶活性的新鲜黄豆粉(粗细度为通过1.5 m m孔筛的筛下物)于烧杯中，加入8 5 m l,水和1 5 m L 0.0 5 M硫酸溶液，充分搅匀，静置1 5 m i n 后，用中 速滤纸过滤，该滤液用于制备13-限制糊精。A 3.7 0.0 5 M硫酸溶液。A 38(3-限制糊精 称取5.0 0 g(以干态计)可溶性淀粉于小烧杯中，加入约2 0 m l,水，搅拌使成悬浮液，然后将悬浮液边搅拌边缓慢倒入盛有约1 0 0 m L 沸腾水的高型烧杯中，并用洗瓶将小烧杯中淀粉全部转移至高型烧杯，继续搅拌并加热使缓慢沸腾2 m i n，然后用表面皿盖上烧杯口，取出用流水冷却，再加入2 5 m L 缓冲溶液及5 0 m Lp-淀粉酶液，在室温下，放置2 4 h 后，加入一匙浮石粉，在1 0 m i n内缓慢加热至沸，保持沸腾5 m i n 后，取出流水冷却，最后用水定容至2 5 0 m L，摇匀、过津，滤液中加几滴甲苯，在2 5 以下贮存5 天，此溶液的 p H须在4.7 士0.1.A 4 仪器和用具A 4.1 玻璃试管.A 4.2 高型烧杯:2 5 0 m L.A 4.3 容量瓶:2 5 0 m L;1 0 0 m L.A 4.4 玻璃漏斗:0 6 c m.GB 9 8 2 6 一 8 8A 4.5 表面皿:尸 c meA 4.6 移液管;2 m L;5 M L;1 5 m L.A 4.7 量筒:2 5 m L;5 0 m L.A 4.8 加液器或移液管:1 0 m L.A 4.9 电炉:1 0 0 0 W oA 4.1 0 恒温水浴:可控温 3 0 士0.1 及 2 0 士0.5 0C,A 4 们秒表A 4.1 2 实验磨粉机。A 4.1 3 筛子:孔径为1.0 m m及0.8 m m,A 4.1 4 p H计或精密p H试纸:可测p H 4.7 士0.1A 4.巧 分光光度计A 5 分析步骇A 5.1 u-淀粉酶溶液的配制A 5.1.1 酶制剂a-淀粉酶液的配制 称取a-淀粉酶制剂4 -8 m g，用。.2%氯化钙溶液溶解并稀释至1 0 0 m L。根据该溶液酶活性的大小再用 0.2%氯化钙稀释至适合于测定活性的溶液，稀释后的溶液应使 3 5%-6 0%的限制糊精在1 5 4 0 m i n 内被降解，即最后测得的吸光度值应为底物校准时吸光度值的 4 0%-6 5%aA 5.1-2 麦芽粉及其他产品a-淀粉酶液的配制 测定麦芽粉可称样 1 0 0 g，如测定其他产品，则根据酶活性的大小拟定称样量，均按下述步骤提取酶