GBT 8312-2002 茶 咖啡碱测定.pdf

G B/r 8 3 1 2-2 0 0 2前言 本标准是对G B/T 8 3 1 2-1 9 8 7 茶咖啡碱的测定 的修订。本标准“第一法高效液相色谱法”等效采用I S O 1 0 7 2 7:1 9 9 5(高效液相色谱法测定茶和固态速溶茶中的咖啡碱含量。本标准与I S O 1 0 7 2 7:1 9 9 5 的主要差异是:将等效采用的I S O 1 0 7 2 7:1 9 9 5 方法作为本标准的第一法。本标准与G B/T 8 3 1 2-1 9 8 7的主要差异是:增加了第一法高效液相色谱法，并将G B/T 8 3 1 2-1 9 8 7 中“紫外分光光度法”作为本标准的第二法。本标准第一法和第二法可获得相同的结果。本标准自 实施之日 起，同时代替G B/T 8 3 1 2-1 9 8 7,本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院归口。本标准起草单位:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。本标准主要起草人:周卫龙、孙安华、钟萝。本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院负责解释。GB/T 8 3 1 2-2 0 0 2I S O前言 I S O(国际标准化组织)是一个各国标准化组织机构(I S O成员团体)的国际性联盟。通常制定国际标准的7 一 作是由I S O技术委员会承担，每个成员团体如有兴趣，都有权成为该项目委员会的代表，与I S O有联系的官方或非官方的国际标准组织也参与工作 I S O与国际电工委员会(I E C)在电工标准文件紧密合作 技术委员会所采纳的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准的出版必须取得不少于成员团体7 5 环的赞成票。国际标准I S O 1 0 7 2 7 是由I S O/T C 3 4 农产食品技术委员会制定。国际标准I S)1 0 7 2 7 的附录A和附录B仅供参考中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准茶咖啡碱测定 G B/T 8 3 1 2-2 0 0 2e 4 v I S O 1 0 7 2 7:1 9 9 5Te a-De t e r mi n a t i o n o f c a f f e i n e c o n t e n t代替 G t 4/T 8 3 1 2 1 9 8 71 范围 本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性G B/T 8 3 0 2-2 0 0 2 茶取样G B/T 8 3 0 3-2 0 0 2 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定第一法高效液相色谱法3 原理 茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后，经高效液相色谱仪、C。分离柱、紫外检测器检测，与标准系列比较定量。4 仪器 和用具 实验室常规仪器及下列各项:4.1 高效液相色谱仪。4.2 紫外检测器:检测波长2 8 0 n m4.3 分析柱:C,a(O D S柱)。4.4 分析天平:感量 0.0 0 0 1 K e5 试荆和溶液 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。5，氧化镁:分析纯。5.2 高效液相色谱流动相:取 6 0 0 m L甲醇倒人 1 4 0 0 m 工重蒸馏水，混匀，脱气。5.3 咖啡碱标准液:称取 1 2 5 m g咖啡碱(纯度不低于”%)加乙醇:水(1:4)溶解，定容至2 5 0 m 工使用时，待标准液至室温后，取 2 m工加水至1 0 0 m L作为工作液。6 操作方法6.1 取样中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 2-0 6-1 7 批准2 0 0 2 一 1 2 一 0 1实施G B/r 8 3 1 2-2 0 0 2 按 G B/T 8 3 0 2 的规定。6.2 试样制备 按 G B/T 8 3 0 3的规定。6.3 测定步骤6.3.1 试液制备 称取 1.0 g(准确至0.0 0 0 1 g)磨碎茶样(6.2),置于5 0 0 m l,烧瓶中.加4.5 g 氧化镁及3 0 0 m l沸水，于沸水浴中加热，浸提 2 0 m i n每隔5 m i n摇动一次)，浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入5 0 0 m L 容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀。取一部分试液，通过。.4 5 p m滤膜过滤，待用6.3.2 色谱条件6.3-2.1 检测波长:紫外检测器，波长 2 8 0 n mo6.3-2.2 流动相:水:甲醇的体积分数为 7:3,6.3.2.3 流速:0.5 m L/m i n 一1.5 m L/m i n6.3-2.4 柱温;4 0 C。6.3.2.5 进样量:1 0 p L-2 0 1A6.13 测定 准确吸取制备液(6-3.1)1 0 p L-2 0 川 一，注人高效液相色谱仪，并用咖啡碱标准液(5.3)制作标准曲线，进行色谱测定了 结果计算了 门计算方法 比较试样和标准样的峰面积，按式(L)计算:咖啡碱(%)=M:X m,只 1 0 0 0又 1 0 0 。(1)几一么 X C式中:C 一一 测定液中咖啡碱含量，K g;L,一 一 样品总体积，mL;L 2 进样体积，1 L;M 一一 试样的质量，9;川.试样干物质含量，%如果符合重复性(7-2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果，结果保留小数点后一位。了.2 重复性 同一样品的两次测定值之差，每1 0 0 g 试样不得超过。.2 g.第二法紫外分光光度法8 原理茶叶中的咖啡碱易溶于水，除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。9 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项:9.1 紫外分光光度仪。9.2 分析天平:感量。.o 01R0.0 0 1G B/T 8 3 1 2-2 0 0 21 0 试荆和溶液 所用试剂应为分析纯(A R)，水为蒸馏水。1 0.1 碱式乙酸铅溶液:称取5 0 g 碱式乙酸铅，加水1 0 0 m l，静置过夜，倾出上清液过滤。1 0.2 盐酸:0.0 1 m o t/L溶液，取 0.9 ml浓盐酸，用水稀释1 L,摇匀1 0.3 硫酸:4.5 mo t 儿 溶液，取浓硫酸 2 5 0 m l，用水稀释至 I I，摇匀1 0.4 咖啡碱标准液:称取 1 0 0 m g 咖啡碱(纯度不低于9 9%)溶于1 0 0 m l水中，作为母液，准确吸取5 m l,加水至1 0 0 m L 作为工作液t 1 r o t含咖啡碱0.0 5 m g)1 1 测定步骤1 1飞 试液制备 称取3 创准确至0.0 0 1 g)磨碎试样(6-2)于5 0 0 m L锥形瓶中，加沸蒸馏水4 5 0 m L，立即移人沸水浴中，浸提4 5 m i n(每隔 1 0 m i n 摇动一次、。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移入5 0 0 ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤 2-3 次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度1 1.2 用移液管准确吸取试液(I t.1)1 0 m 工，移人 1 0 0 m L容ff瓶中，加人 4 m t,0.0 1 m o t/L盐酸(1 0.2)和1 ml碱式乙酸铅溶液(1 0.1)，用水稀释至刻度，提匀，静置澄清过滤，准确吸取滤液2 5 m L,注人 5 0 m l容量瓶中，加人。.1 m 工4.5 m o l l 硫酸溶液(1 0.3)，加水稀释至刻度，混匀，静置澄清过滤。用1 0 m m比色杯，在波长2 7 4 n m处 以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)d1 1.3 咖啡碱标准曲线的制作 分别吸取。,1,2,3,4,5,6 m l,咖啡碱工作液(1 0.4)于一组 2 5 ml容量瓶中，各加人 1.0 m L盐酸(1 0.2),用水稀释至刻度，混匀，用1 0 m m石英比 色杯，在波长2 7 4 n m处，以试剂空自 溶液作参比，测定吸光度(A)将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线1 2 结果计算 茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示，按式(2)计算;式中:C,I 咖啡碱(%)一根据试样测得的吸光度(A)C,L a 1 0 0 0_5 02 5MX m,又 1 0 0。(2)，从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,m g/m L t试液总量，m l;M。一一试样用量，9;m:一试样干物质含量,%如果符合重复性(7.2)，取两次测定的算术平均值作为结果，保留小数点后一位。