GBT 5009.26-1996 食品中N-亚硝胺类的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准G s/T 5 0 0 9.2 6-1 9 9 6食品中N 一 亚硝胺类的测定方法代替 G B 5 0 0 9.2 6-8 5Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f N-n i t r o s a mi n e s i n f o o d s第一篇气相色谱一 热能分析仪法(第一法)1 主题内容与适用范围 本标准规定了用气相色谱一 热能分析仪(G C-T E A)测定啤酒中挥发性N 一 亚硝胺的测定方法。本标准适用于啤酒中N 一 亚硝基二甲 胺含量的测定。仪器的最低检出量为0.1 n g，在样品取样量为5 0.g，浓缩体积为。.5 m L，进样体积为1 0 F L 时，本方法的最低检出浓度为0.1 l c g/k g;在取样量为2 0 g，浓缩体积为1.0 m L，进样体积为5 f L 时，本方法的最低检出浓度为1.0 p g/k g,2 原理 样品中N 一 亚硝胺经硅藻土吸附或真空低温蒸馏，用二抓甲 烷提取、分离，气相色谱一 热能分析仪(G C-T E A)测定。其原理如下:自 气相色谱仪分离后的亚硝胺在热解室中 经特异性催化裂解产生N O基团，后者与臭氧反应生成激发态N O。当 激发态N O，返回 墓态 时发 射出 近红 外区 光线(6 0 0 -2 8 0 0 n m)。产生的 近红外区 光线被光电倍增管检测(6 0 0-8 0 0 n m)。由 于特异性催化裂解与冷阱或C T R过滤器除去杂质，使热能分析仪仅仅能检测N O基团，而成为亚硝胺特异性检测器。3 试剂3.1 二氯甲 烷:每批取 1 0 0 M I在水浴上用K-D浓缩器浓缩至1 m L，在热能分析仪上无阳性响应。如有阳性响应，则需经全玻璃装置重蒸后再试，直至阴性。3.2 氢氧化钠溶液(1 m o l/L):称取4 0 g 氢氧化钠(N a O H)，用水溶解后定容至1 L,3.3 硅藻土:E x t r e l u t(M e r c k).3.4 氮气。3.5 盐酸(0.1 m o l/L)o3.6 无水硫酸钠。3.7 N 一 亚 硝 胺 标 准 储 备 液(2 0 0 m g/L):吸 取N 一 亚 硝 胺 标 准1 0 k L(约 相 当 于1 0 m g)置 子 已 加 入 5 m L无 水乙 醇并称重的5 0 m L棕色容量瓶中，称量(准确到。.0 0 0 1 g)。用无水乙 醉稀释定容，混匀。分别得到N 一 亚硝基二甲 胺、N 一 亚硝基二丙胺、N 一 亚硝基吗琳的储备液。此溶液用安瓶密封分装后避光冷藏(一3 0 C)保存，两年有效。3.8 N 一 亚硝胺标准工作液(2 0 0 F i g/L):吸取上述N 一 亚硝胺标准储备液(3.7)1 0 0 p L,置于1 0 m L 棕色容量瓶中，用无水乙醇稀释定容，混匀。此溶液用安瓶密封分装后避光冷藏(4 0C)保存，三个月有效。中华人民共和国卫生部1 9 9 6 一 0 6 一 1 9 批准1 9 9 6 一 0 9 一 0 1 实施c a/T 5 0 0 9.2 6-1 9 9 64 仪器气相色谱仪。热能分析仪。玻璃层析柱:带活塞，8 m m内 径，4 0 0 m m长。减压蒸馏装置。K-D浓缩器。恒温水浴锅。4142们44仍465 分析步骤5 门提取5.1.1 甲法:硅藻土吸附 称取2 0.0 0 g 预先脱二氧化碳气的样品于5 0 m L 烧杯中，加1 m L 氢氧化钠溶液(1 m o l/L)和1 m LN 一 亚硝基二丙胺内 标工作液(2 0 0 p g/1)，混匀后备用。将1 2 g E x t r e l u t 干法填于层析柱中，用手敲实。将啤酒样品装于柱顶。平衡 1 0 -1 5 m i n 后，用6 X5 m L二抓甲 烷直接洗脱提取.5.1.2 乙法:真空低温蒸馏5.1.2 门在双颈蒸馏瓶中加入5 0.0 0 g 预先脱二氧化碳气的样品和玻璃珠，4 m L氢氧化钠溶液(1 m o l 凡)，混匀后连接好蒸馏装置。在5 3.3 k P a 真空度低温燕馏，待样品剩余1 0 m L 左右时，把真空度调节到9 3.3 k P a，直至样品蒸至近干为止。5.1.2.2 把蒸馏液移入2 5 0 m L 分液漏斗，加4 m L 盐酸(0.1 m o l/L)，用2 0 m L 二抓甲 烷提取三次，每次3 m i n，合并提取液。用1 0 g 无水硫酸钠脱水。5.2 浓缩 将二抓甲烷提取液转移至K-D浓缩器中，于5 5 水浴上浓缩至1 0 m L，再以缓慢的氮气吹至0.41.0 m L，备用。5.3 样品测定5.3.1 气相色谱条件5.3.1.1 汽化室温度:2 2 0 C.5.3.1.2 色谱柱温度:1 7 5 C，或从7 5 以5 C/m i n 速度升至 1 7 5 后维持。5.3.1.3 色谱柱:内径2 -3 m m，长2 -3 m玻璃柱或不锈钢柱，内 装涂以固定液1 0 肠(m/m)聚乙 二醇2 0 M和氢氧化钾(1 0 g/L)或1 3%(二/二)C a r b o w a x 2 0 M/T P A于载体C h r o m o s o r b WA W-D M C S(8 0-1 0 0目)。5.3.1.4 载气:氢气，流速2 0 -4 0 m L/m i n,5.3.2 热能分析仪条件5.3.2.1 接口温度:2 5 0 0C,5.3.2.2 热解室温度:5 0 0 C.5.12.3 真空度:1 3 3 -2 6 6 P a,5.3.2.4 冷阱:用液氮调至一1 5 0 C(可用C T R过滤器代替).5.3.3 测定 分别注人样品浓缩液和N 一 亚硝胺标准工作液5 -1 0 V L，利用保留时间定性，峰高或峰面积定量。6 计算X,h 火V 2 X h 2火 Vlc,X_X V(1)c B/T 5 0 0 9.2 6-1 9 9 6式中:x,样品中N 一 亚硝基二甲 胺的含量，F i g/k g;h,样品浓缩液中N 一 亚硝基二甲 胺的峰高(m m)或峰面积，h,标准工作液中N 一 亚硝基二甲 胺的峰高(m m)或峰面积;1 标准工作液中N 一 亚硝基二甲胺的浓度，f g/L;V,样品浓缩液的进样体积，p L;V,标准工作液的进样体积，i L;v 样品浓缩液的浓缩体积，p L;m 样品的 质量，9。结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。7 允许差相对相差 g(m L)e 结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由 北京医科大学公共卫生学院、中国预防医 学科学院营养与食品卫生研究所负责起草;第二法由吉林省卫生防疫站负责起草。本标准由 卫生部委托技术归口 单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。