GBT 17999.3-1999 SPF鸡血清平板凝集试验.pdf

G R/r 1 7 9 9 9.3-1 9 9 9前言 本标准参照农业部1 9 9 2 年版 鸡白痢一 鸡伤寒沙门氏菌多价染色平板凝集抗原与阴、阳性血清制备及检验规程 编制而成 S P F x 鸟 微生物学质量控制国家系列标准，包括S P F鸡微生物学监测总则和9 种S P F鸡微生物学检测方法 本标准为 S P F鸡血清平板凝集试验。S P F鸡微生物学检测方法还包括以下部分:G B/T 1 7 9 9 9.1-1 9 9 9 S P F鸡红细胞凝集抑制试验;G B/T 1 7 9 9 9.2 1 9 9 9 S P F 鸡 血清中 和试验;G B/T 1 7 9 9 9.4-1 9 9 9 S P F鸡琼脂扩散试验;G B/T 1 7 9 9 9.5一 1 9 9 9 S P F 鸡 酶联免疫吸附试验;G B/T 1 7 9 9 9.6-1 9 9 9 S P F鸡胚敏感试验;G B/T 1 7 9 9 9.7-1 9 9 9 S P F 鸡 鸡白痢沙门氏 菌检验;G B/T 1 7 9 9 9.5-1 9 9 9 S P F 鸡 试管凝集试验;G B/T 1 7 9 9 9.9-1 9 9 9 S P F 鸡 间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口 本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红。中华 人民 共 和 国 国 家标 准S P F鸡血清平板凝集试验G B/r 1 7 9 9 9.3-1 9 9 9S P F c h i c k e n 一 S e r u m p l a t e a g g l u t i n a t i o n t e s t1 范围 本标准规定了鸡血 清平板凝集试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于S P F 鸡感染以下病原菌后的凝集抗体的监测:鸡白 痢沙门氏菌(S a l m o n e l l a p u l l o-，一:a n),鸡毒支原体(M y c o p l a s m a g a l l i s e p t i c u m),滑液囊支原体(M y c o p l a s m a.s y n o v i a e),M IJ 鸡嗜血杆菌(H a e m o p h i l u s p a ra g a l l i n a r u m),2 原理 血清平 板凝集试验是细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量的电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象常采用已知的标准细菌性抗原液检测相应的凝集抗体。3 试剂和材料313.1.13.1.23.1.33.23.2.13.2.2试剂 凝集抗原。阴性、阳性血清 被检血清。材料玻璃板。移液器(T D 1 0 川-2 0 0 阿)及吸头4 操作程序4.1 使用前1 0 m i n-2 0 m i n自 冰箱取出抗原、阴性或阳性血清与被检血清，使其达到室温。4.2 用移液器吸取充分混匀的诊断抗原一滴(。0 2 5 ml _ 一。0 5 m l)，垂直滴于玻璃板上，然后迅速在杭原旁边滴加同量的被检血清一 滴(0.0 2 5 m L-0.0 5 m L)4.3 用牙签使血清与抗原混合均匀，涂布成直径为1 c m-2 c m的片状，不断摇动玻璃板，2 m i n内 观察结果。4.4 试验应在2 0 C一2 5 C 条件下进行。4.5 每批试验应设阳性血清与阴性血清对照5 结果判定 在2 m i n内出现5 0 0 0(+)以上凝集者为阳性，2 m i n内不凝集(一)者为阴性，介于上述两者之间为叮 凝，凝集判读标准见表1。国家质量技术监督局1 9 9 9 一 1 1 一 1 0 批准2 0 0 0 一 0 4 一 0 1 实施G B/T 1 7 9 9 9.3-1 9 9 9表 1 血清平板凝集试验判读标准类别平板所见结果判定Iz3出现大的凝集块，底质清亮，即1 0 o%凝集出现明显凝集块，底质稍有混浊，即 7 5%凝集出现可见的凝集颗粒，底质混浊，即5 0%凝集+十 十+斗+阳性4底质极混浊，出现轻微可见的微细颗粒，即2 5%凝集十可凝5底质均匀一致极混浊，无凝集现象，即不凝集阴性