GBT 23209-2008 奶粉中叶黄素的测定 液相色谱-紫外检测法.pdf

Cs 67.050【04中 华 人民 共 和 国 国 家 标 准GB/T2320-2008奶粉 中叶黄素的测定液相色谱冖紫外检测法De t e n i n a t i o n o f Iu t e i n i n m k p o w d e r-HPLC-UV m c t h o d2008-131发布2009-05-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验检嚯总垦 发布中 国 国 家 标 准 化 管 理GB/T232092008目 刂 舀本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人 民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人 民共和 国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人 民共和国深圳 出入境检验检疫局。本标准主要起草人:陈波、谢丽琪、林燕奎、靳保辉、吴凤琪、庞国芳。GB/T232092008奶粉 中叶黄素的测定液相色谱-紫外检测法1 范围本标准规定 了奶粉中叶黄素(l u t。n)的高效液相色谱测定方法。本标准适用于奶粉中叶黄素的测定。本标准的方法检出限为0.05m g/k g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期 的引用文件,其 随后所有的修改单(不 包括勘误 的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1 测量 方 法 与 结 果 的 准 确 度(正 确 度 与 精 密 度)第1部分:总 则 与 定 义(GB/T6379.-2004,ISo 5725:1994,IDT)GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正 确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(G B/T 6 3 7 9.2 0 4,I S 0 5 7 2 5 乇:1 9 9 4,I D T)GB/T6682 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法(GB/T66822008,ISo 3696:1987,MOD)3 原理奶粉 中叶黄素用丙酮提取,浓缩后用高效液相色谱仪测定,外标法定量。4 试剂和材料 水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1 甲醇:色谱纯。4.2 甲基叔丁基醚:色谱纯。4.3 二氯 甲烷:色谱纯。4.4 丙酮:优级纯。4.5 2,6二叔丁基对 甲酚(BHT):纯度)99%。4.6 含0.1%BHT的丙酮溶液:称取0.500g BHT(4.5)干500m L容量瓶中,用丙酮(4.4)溶解并定容至刻度。4.7 叶黄素:纯度 9 6.2%。4.8 标准储各溶液(1000m g/L):称量10.0m g 标准物质,用 二氯 甲烷(4.3)溶解并定容至 10m L容量瓶,在-80冰箱中避光保存。4.9 标准中问溶 液:吸 取标 准储 各 溶液 于100m L容量 瓶,用 甲醇定 容 至刻度,充分混 匀,配 制成 m g/L标准中间溶液。将标准中间溶液分装于液相小瓶中,在-80冰箱 中避光保存。4.10 标准工作溶液:根据灵敏度和使用需要,用丙酮溶液(4.6)稀释成标准工作溶液,此标准工作溶液需于分析前临时配制。4.ll 滤膜:0.2 um。GB/T23209一20085 仪器5.1 高效 液相色谱仪,配紫外检测 器。5.2 分析天平:感量0.1 mg。5.3 液体混合器。5.4 氮气浓缩仪。5.5 低温离心机:转速不低于5000m i n,可制冷到-4。6 样品保存将奶粉样品于常温下密封保存。7 测定步骤7.1 提取准确称取奶粉0.5g,精确至0.001g,置于50m L聚丙烯离心管中。在避光条件下,加人 10m L丙酮溶液(4.6),振荡提取约3m i n。以5000r/m i n 低温离心 5m i n,移取上清液至一干净的15m L离心管,于 30氮吹浓缩至少于l m L。用丙酮溶液(4.定容至1m L,在液体混合器上充分振荡混匀,样液过0.2u m 滤膜,用液相色谱仪测定,外标法定量。7.2 测定条件7,2.1 液相色谱参考条件a)色谱柱:Y M C T M C a r o t e n o i d,5 u m,2 5 0 m m 4.6 m m(内径)或相当 者;b)柱温:25;c)流速:1.0 mL/n、in;d)检测波长:4 4 5 nm;e)进样量:5 0 uL;f)梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件7.2.2 液相色谱测定用叶黄素标准工作溶液分别进样,以标准工作溶液浓度为横坐标,以 峰面积为纵坐标,绘 制标准工作曲线。用标准工作 曲线对样品进行定量,样 品溶液中叶黄素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,叶黄素的参考保 留时问为6.09m m。叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图参见图A。1。本标准平均 回收率的试验数据参见附录B。7.3 平行试验按上述步骤,对 同一试样进行平行试验测定。7.4 空白试验除不加标外,均按上述分析步骤进行。2时问/m i n甲醇/%甲基叔丁基醚/%0GB/T2320920088 结果计算外标法定量,按式(1)计算试样 中叶黄素含量:x=c券端 式 中:X样品中待测组分的含量,单位为毫克每千克(m g/k g);c 从标准工作 曲线得到的试样溶液中待测组分的浓度,单位为毫克每升(m g/L);V试样溶液定容体积,单位为毫升(m L);勿最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g)。计算结果应扣除空 白值。9 精密度9.1 一般规定本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其 重复性和再现性 的值以95%的可信度来计算。9.2 重复性在重复性试验条件下,试样中叶黄素含量在1.0m g/k g 50.0m g/k g,获得 的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,重复性限按式(2)计算:l g r=o.719 5 1g 狃-1.171 2 (2)式中:印两次测定值 的平均值,单位为毫克每千克(m g/k g)。如果两次测定值 的差值超过重复性限r,则应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3 再现性在再现性试验条件下,试样中叶黄素含量在1.0m g/k g 50.0m g/k g,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,再现性限按式(3)计算:R=0.I 2 1 5 狃+0.0 0 3 1 (3)式 中:勿两次测定值 的平均值,单位为毫克每千克(m g/k g)。GB/T2320g _2008附 录 A(资 料性 附录)叶黄素 的奶粉基质加标液相色谱 图叶黄 素 的奶 粉基质加标液相色谱 图见 图A.1。响应值3 4 5 6 7图A。1 叶黄素 的奶粉基质加标液相 色谱 图GB/T232092008附 录 B(资 料性附录)回 收 率本标准中叶黄素添加浓度及平均回收率的试验数据:在添加量为50u g/k g 时,平均 回收率为96.2%;在添加量为100u g/k g 时,平均 回收率为97.l%;在添加量为0u g/k g 时,平均 回收率为96.5%;在添加量为400u g/k g 时,平均 回收率为93.9%;在添加量为5.0m g/k g 时,平均回收率为98.4%。