GBT 17999.8-1999 SPF鸡试管凝集试验.pdf

G B/r 1 7 9 9 9.8-1 9 9 9前言 用血清平板凝集试验监测鸡白痢沙门氏菌感染，结果难以判定时，可用试管凝集试验(T A)进行复检，为此本标准规定了S P F鸡试管凝集试验。S P F鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括S P F鸡微生物学监测总则和9 种S P F鸡微生物学检测方法.本标准为 S P F鸡试管凝集试验。S P F 鸡微生物学检测方法还包括以下部分:G B/T 1 7 9 9 9.1-1 9 9 9 S P F 鸡 红细胞凝集抑制试验;G B/T 1 7 9 9 9.2-1 9 9 9 S P F 鸡 血清中和试验;G B/T 1 7 9 9 9.3-1 9 9 9 S P F 鸡 血清平板凝集试验;G B/T 1 7 9 9 9.4-1 9 9 9 S P F 鸡 琼脂扩散试验;G B/T 1 7 9 9 9.5-1 9 9 9 S P F 鸡 酶联免疫吸附试验;G B/T 1 7 9 9 9.6-1 9 9 9 S P F 鸡 胚敏感试验;G B/T 1 7 9 9 9.7-1 9 9 9 S P F 鸡 鸡白 痢沙门氏 菌检验;G B/T 1 7 9 9 9.9-1 9 9 9 S P F 鸡 间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出 本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物中心。本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红。中华 人 民共 和 国国 家 标 准S P F 鸡试管凝集试验G s/T 1 7 9 9 9.8 一 1 9 9 9S P F c h i c k e n-T u b e a g g l u t i n a t i o n t e s t1 范围本标准规定了 试管凝集试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于S P F鸡感染鸡白痢沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌后的抗体监测。2 原理 同血清平板凝集试验，亦是细菌性抗原与相应的抗体结合后 在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象，只是结果判定以凝集价表示3 试剂和材料3.1 抗原:试管凝集试验用鸡白痢一 鸡伤寒抗原(含菌1 0 亿/m L)32 阳性、阴性血清。13 被检血清口3.4 o.5 Y,石炭酸生理盐水:了，炭酸5 9;a化钠 8.5 9;蒸 馏水 1 0 0 0 m L;混合溶化，6.8 9 7 P a 2 0 m i n 消毒备用15 常规血清学试验用品。4 操作程序4.1 每份被检血清需要5 支小试管(口 径8 m m-1 0 m m)。第1 管加石炭酸生理盐水1.8 m L，其余管各加I m l。4.2 第1 管加被检血清。.2 m L，与石炭酸生理盐水混匀(使成1:1 0 稀释)。取1 m L 移至第2 管，混匀后连续倍比 稀释至第4 管，最后从第4 管内吸出1 m L弃去。如此各管血清最后稀释依次为I:2 0,1:4 0,1,8 0,1:1 6 0,1:3 2 04.3 各管加入抗原液1 m L4.4 振荡混匀后 置3 7 C 感作2 4 h，观察结果。4.5 梅次试验须设三种对照各一份。4.5.1 抗原对照:在试管中加抗原液 1 m L，再加。.5%石炭酸生理盐水 1 mL o4.5.2 阳性血清对照 阳性血清稀释至原来效价，每管加入抗原液 1 m L4.5.3 阴性血清对照:操作方法同被检血清。4.5.4 全部试管振荡后，置3 7 C 2 4 h 后移入4 C-8 C 冰箱过夜，使结果更易判定4.6 结果观察国家质量技术监督局1 9 9 9 一 1 1-1 0 批准2 0 0 0 一 0 4 一 O 1 实施G B/T 1 7 9 9 9.8-1 9 9 94.6.1 从4 0C-8 冰箱取出试管架，暂不振动试管。4.6.2 轻轻取出每支试管，先观察试管内上清液和管底凝集物，再轻振管底，使凝块从管底升起，最后按液体清浊、凝块大小记录。4.6.3 观察结果时应首先观察抗原对照与阴性血清对照，均应呈“一，(即不凝集)，阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验可靠。4.6.4 凝集结果判定见表 t o 表 1 试管凝集结果判定类别试管所见结果1细菌全部形成凝块，上层液完全透明+2大部分细菌形成凝块，上层液透明 度达7 5 0/a+3约5 0%细菌形成明显可见凝集块，上层液透明度达 5 0%+十4仅有少部分细菌形成小凝块，上层液透明 度达2 5%+5无凝集块，液体均匀混浊(有部分菌体因静置而沉于管底，轻轻摇后细菌如云烟状升起，但很快消失)4.6.5 效价以呈现“+”凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。5 结果判定凝集价)1:8 0 为阳性;凝集价为1:4 0 为可疑;凝集价镇1:2 0 为阴性。