GBT 18204.8-2000 公共场所拖鞋微生物检验方法 霉菌和酵母菌测定.pdf

G B/T 1 8 2 0 4.8-2 0 0 0前 协曰 为贯彻执行 公共场所卫生管理条例 和G B 9 6 6 3 -9 6 7 3-1 9 9 6,G B 1 6 1 5 3-1 9 9 6 公共场所卫生标准，加 强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准 中的方法是与 G B 9 6 6 3-9 6 7 3-1 9 9 6,G B 1 6 1 5 3-1 9 9 6 相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位：北京市卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人：高晖、封幼玲、周淑玉、符晓梅、韩秀媛。中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准公共场所拖鞋微生物检验方法 霉菌和酵母菌测定G B/T 1 8 2 0 4.8-2 0 0 0Me t h o d s o f m i c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n f o r s l i p p e r s i n p u b l i c p l a c e s -D e t e r mi n a t i o n o f mo l d s a n d y e a s t s c o u n t范 围本标准规定了公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的检验方法。本标准适用于公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的测定。2 定义 本标准采用下列定义。霉菌和酵母菌测定 d e t e r m in a t i o n o f m o l d s a n d y e a s t s c o u n t 指在一定条件培养后，5 0 c m“面积检样中所含有的霉菌和酵母菌落数。霉菌和酵母菌主要作为判定被检样品被霉菌和酵母菌污染程度的标志，以便对被检样进行卫生学评价时提供依据。仪器 和材料3.1 恒温箱：2 5 -2 8 C o3.2 显微镜。3.3 高压蒸汽灭菌器。3.4 酒精灯。3.5 接种针。3.6 平皿：直径 9 c m o3.7 试 管架。3.8 试管。3.9 玻璃珠。3.1 0 无菌棉拭子。4 培养墓和试剂4.1 生理盐水 氯化钠 蒸馏 水 溶解后，分装到加玻璃珠的试管内4.2 霉菌培养基 成分：蛋白脉 酵母浸 出粉8.5 g1 0 0 0 mL,1 0 m L和 9 m L,1 2 1 C 2 0 m i n高压灭菌。5g2g国家质f技术监督局2 0 0 0 一 0 9 一 3 0 批准2 0 0 1 一 0 1 一 0 1 实施G B/T 1 8 2 0 4.8 一 2 0 0 0 葡萄糖2 0 g 磷酸氢二钾1 g 硫酸镁（Mg S O*7 H _ 0)0.5 g 琼脂2 0 g 氯霉素0.1 g 蒸馏水1 0 0 0 mL 制法：除葡萄糖外，取上述成分加人水内，微温溶解，调 p H 为 6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，过滤调p H，使灭菌后 p H 为 6.4 士0.2 1 1 5 C 2 0 m i n高压灭菌。4.3 虎红（孟加拉红）培养基 成分：蛋白陈5 9 葡萄糖1 0 g 磷酸二氢钾1 g 硫酸镁（Mg S 0 4 7 H 2 0)0.5 g 琼脂2 0 g 1：3 0 0 0虎红水溶液1 0 0 mL 氯霉素。.1 g 蒸馏水1 0 0 0 mL 制法：将上述各成分（除虎红外）加人蒸馏水 中溶解后，再加人虎红溶液，分装后，高压灭菌 1 2 1 C2 0 mi n。4.4 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（P D A)成分：马铃薯（去皮切块）3 0 0 g 葡萄糖2 0 g 琼脂2 0 g 蒸馏水1 0 0 0 m L 制 法：将马铃薯去皮切块，加 1 0 0 0 m L蒸馏水，煮沸 1 0-2 0 m i n。用纱布过滤，补加蒸馏水至1 0 0 0 m L。加人葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，1 2 1 C 高压灭菌 2 0 m i n,5 操作步骤5.1 将无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水，在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处 5 c m X 5 c m 面积上，有顺序地均匀涂抹 3 次（一双拖鞋为一份样品）后，用灭菌剪刀将棉拭子手执部分剪断，将棉拭子放人 1 0 m L装有玻璃珠 的无菌盐 水管 中。5.2 将盛有棉拭子的盐水管在手心用力振荡 1 0 0 次，再用带橡皮乳头的 1 m L灭菌吸管反复吹吸 5 0次，使霉菌抱子充分散开。此液为 1：1 0 稀释液。5.3 用灭菌吸管吸取 1:1 0 检液 2 mL，分别注人到 2 个灭菌平皿内，每皿 1 m L。另取 1 M L注人 9 m L加有玻璃珠的灭菌盐水管中，换 1 支 1 m L灭菌吸管吹吸 5 次，此液为 1 1 0 0 稀释液。5.4 按上述操作顺序作 1 0 倍递增稀释液，每稀释一次，换一支 1 m L灭菌吸管，根据样品的污染情况，选择 3 个合适的稀释度。5.5 将溶化并冷却至 4 5 C 左右的培养基注入灭菌的平皿中，待琼脂凝固后，倒置于 2 5-2 8 0C 温箱中，3天后开始观察，共培养观察一周。5.6 计算方法：通常选择菌落数在 3 0 -1 0 0之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每毫升检样中所含真菌数。若有两个稀释度的菌落数皆在规定范围之间或三个稀释度皆不在此范围时，应参照细菌总数的报告方式报告。5.7 结果报告：见式（1)0G B/T 1 8 2 0 4.8 一 2 0 0 0m n k（1）式 中：，儿真 菌 菌 落 数，c f u/5 0 c m ;每皿的平均真菌菌落数；k 稀释倍数。注：一只拖鞋的涂抹面积是 2 5 c m (5 c m X5 c m)；一双拖鞋的涂抹面积则为 5 0 c m 2(2 5 c m 2 X2).