GBT 17999.6-1999 SPF鸡胚敏感试验.pdf

G B/r 1 7 9 9 9.6-1 9 9 9 前言 禽脑脊髓炎病毒(A E V)感染常用的监测方法有琼脂扩散试验(A G P)和胚敏感试验(E S)二者均可对A E V感染做出确诊 E S已在我国S P F鸡场的A E监测中得到应用和验证，本标准在此基础上，规定rS P F鸡胚敏感试验 S P F鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括S P F鸡微生物学监测总则和9 种S P F鸡微生物学检测方法本标准为 S P F鸡胚敏感试验。S P F 鸡微生物学检测方法还包括以下部分:(:B/T 1 7 9 9 9.1一 1 9 9 9 S P F鸡红细胞凝集抑制试验;G B/T 1 7 9 9 9.2-1 9 9 9 S P F鸡血清中和试验;G B 厂 I 1 7 9 9 9.3-1 9 9 9 S P F鸡血清平板凝集试验;G B/T 1 7 9 9 9.4-1 9 9 9 S P F 鸡 琼脂扩散试验;G B/T 1 7 9 9 9.5-1 9 9 9 S P F 鸡 酶联免疫吸附试验;G B/T 1 7 9 9 9.7-1 9 9 9 S P F 鸡 鸡白 痢沙门氏菌检验;(_;i i/,r 1 7 9 9 9.8-1 9 9 9 S P F鸡 试管凝集试验;G B/T 1 7 9 9 9.9-1 9 9 9 S P F鸡(H 1 接免疫荧光试验 本标准山中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出 本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。本标准主要起草人:赵立红、陈德威、张秀美、张冰、李军。中华 人 民共 和 国 国 家标 准S P F鸡 胚敏感试验G B/T 1 7 9 9 9.6 一 1 9 9 9S P F c h i c k e n-E mb r y o s u s c e p t i b i l i t y t e s t1 范围 本标准规定了 胚敏感试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于S P F 鸡感染禽脑脊髓炎病毒后的抗体监测。2 原理 V a n R o e k e l 毒株是禽脑脊髓炎病毒的一株胚适应毒株，具有高度嗜神经性。对非免疫鸡群的鸡胚有致病性，引 起肌肉营养不良、运动性降低、足趾卷曲等特征性病变。免疫鸡群的 鸡胚对经卵黄囊接种的病毒有抵抗力。3 试剂和器材3.1 试剂3.1.1 A E-V a n R o e k e l 病毒(0.2 m l含1 0 0 E I D s o)3.1.2 S P F蛋3.1.3 被检蛋。3.2 器材3.2.1 1 ml注射器3.2.2 7“针头3.2.3 恒温培养箱3-2-4 超净工作台。3.2.5 小型孵化器:.;操作程序 取被检蛋及S P F蛋孵至6日 龄。取6日 龄被检鸡胚，每胚经卵黄囊接种。.2 m 工 _ 含1 0 0 E I D s o 的A E-V a n R o e k e l 病毒液，接种完毕用蜡封孔，同时取6日 龄S P F鸡胚接种与不接种病毒作为对照4.3 接种后的鸡胚，置3 7 C-3 7.5 C 孵化器中孵化，每天照蛋一次，取出死亡鸡胚，接种后第1 2 d 取出全部鸡胚待检4.4 观察病变:非免疫鸡的鸡胚感染V a n R o e k e l 后出现特征性病变，早期为胸腹部肌肉、皮下水肿，当接种后i o d-1 2 d 解剖活胚时，见腿肌萎缩、足趾卷曲，注意与接种、不接种S P F对照鸡胚对比观察。5 结果判定5.1 当接种S P F对照鸡胚均呈禽脑脊髓炎病毒所致的特异病变，不接种S P F 对照鸡胚无特异病变时，国家质量技术监督局1 9 9 9 一 1 1 一 1 0 批准2 0 0 0 一 0 4 一 0 1 实施c s/T 1 7 9 9 9.6 一1 9 9 9试验结果可靠。5.2 判定 阴性:1 0 0%鸡胚有特征性病变，表明此鸡群无禽脑脊髓炎病毒抗体，属非感染鸡群。阳性 5 0%以下的鸡胚有特征性病变，表明此鸡群有禽脑脊髓炎病毒抗体，属感染鸡群。