GB 23200.104-2016 食品安全国家标准 肉及肉制品中2甲4氯及2甲4氯丁酸残留量的测定 液相色谱-质谱法.pdf

ICS中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GBGB 23200.1042016代替SN/T 13922004食品安全国家标准肉及肉制品中 2 甲 4 氯及 2 甲 4 氯丁酸残留量的测定液相色谱-质谱法National food safety standardsDetermination of MCPA and MCPB residues in meat and meat productsLiquid chromatography-mass spectrometry2016-12-18 发布2017-06-18 实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部发布国家食品药品监督管理总局GB 23200.1042016I前前言言本标准代替SN/T 1392-2015 出口肉及肉制品中2甲4氯和2甲4氯丁酸残留量检测方法液相色谱/串联质谱法。本标准与SN/T 1392-2015相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称中“出口肉及肉制品”改为“肉及肉制品”；标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 1392-2004；SN/T 1392-2015。GB 23200.10420161食品安全国家标准食品安全国家标准肉及肉制品中肉及肉制品中 2 2 甲甲 4 4 氯及氯及 2 2 甲甲 4 4 氯丁酸残留量的测定氯丁酸残留量的测定液相色谱液相色谱-质谱法质谱法1范围范围本标准规定了出口肉及肉制品中2甲4氯和2甲4氯丁酸残留量检测的液相色谱-质谱测定方法。本标准适用于出口冻分割牛肉、鱼肉、猪肉、鸡肉、牛肉罐头中 2 甲 4 氯和 2 甲 4 氯丁酸残留量的检测，其它食品可参照执行。2 2规范性引用文件规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 3原理原理在酸性条件下，用二氯甲烷提取试样中残留的2甲4氯、2甲4氯丁酸，提取液经溶剂置换后采用液相色谱-质谱-质谱检测，外标法定量。4 4试剂和材料试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.14.1试剂试剂4.1.1 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。4.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.3甲酸（HCOOH）:色谱纯。4.1.4浓硫酸（H2SO4）：优级纯。4.1.5氯化钠：优级纯。4.24.2溶液配制溶液配制4.2.1 硫酸-水（1+9，V/V）：取 100 mL 浓硫酸，加入 900mL 水，摇匀备用。4.2.2 0.1%甲酸水溶液：取 1 mL 甲酸，以水定容至 1000 mL。4.4.3 3标准品标准品2甲4氯丁酸标准品：纯度99%，CAS:94-82-6。4.44.4标准溶液配制标准溶液配制4.4.1 0.1 mg/mL 标准品储备液：准确称取适量的 2 甲 4 氯、2 甲 4 氯丁酸标准品，用甲醇配制成浓度为 0.1 mg/mL 标准品储备溶液。保存于 4冰箱内。4.4.2 混合标准工作液：使用相应基质溶液配制成适用浓度的标准工作溶液，保存于 4冰箱内。5 5仪器和设备仪器和设备5.1超高压液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。5.2高速均质器：不低于 12000 r/min。5.3离心机：不低于 4000 r/min。5.4分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5.5氮吹仪。5.6涡旋混合器。6 6 试样制备与保存试样制备与保存GB 23200.104201626.1 试样制备试样制备取有代表性样品500g，样品取样部位按GB 2763附录A执行，采用粉碎机粉碎后，再将其研磨成细粉状，装入洁净的玻璃盛样容器内，密封并标明标记。6.2 试样保存试样保存将试样于-18 冷冻保存。7 7分析步骤分析步骤7.1提取与净化提取与净化称取试样4 g（精确到 0.01 g）于50 mL离心管中，加 3 mL甲醇、1 mL硫酸-水、2 g氯化钠和 20 mL二氯甲烷。在高速均质器上均质提取 2 min，离心，取上清液于另一离心管中，静置，取下层二氯甲烷层10 mL。重复提取一次，合并两次提取液，于40oC下氮吹近干，用甲醇定容至2 mL，涡旋，过膜，供超高压液相色谱串联质谱测定。7.27.2 测定测定7.2.17.2.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件a)色谱柱:C18，1.8m，2.150 mm 或相当者；b)0.1%甲酸水溶液+甲醇，梯度洗脱见表 1；c)流速：0.5 mL/min；d)进样量：5 L；e)柱温：室温；表 1液相色谱梯度洗脱程序时间（min）0.1%甲酸水溶液（%）甲醇（%）0.080200.580201.040601.520803.020805.080207.2.2质谱参考条件质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源b)扫描方式：负离子模式c)检测方式：多反应监测 MRMd)分别率：单位质量分辨率e)其他参考质谱条件参见 A.17.2.3 色谱测定与确证色谱测定与确证按照确定的液相色谱-串联质谱条件测定样品和空白基质加标准工作溶液，响应值均应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积外标法定量，负离子模式扫描。在上述色谱条件下，2甲4氯和2甲4氯丁酸的保留时间约为1.90 min和2.10 min。2甲4氯和2甲4氯丁酸标准溶液的选择离子流图参见附录B.1和附录B.2。如果样液与标准工作溶液的选择性离子流色谱图中在相同保留时间有色谱峰出现，可根据产生的两组离子对之间的丰度比，对其进行确证。在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差在2.5%之内；且试样谱图中各组分定性离子的相对丰度与标准工作溶液中定性离子的相对丰度其允许偏差不超过表2规定的范围时，则可确定为样品中存在这种待测物。使用气相色谱使用气相色谱-质谱定性时相对离子丰度最大容许误差质谱定性时相对离子丰度最大容许误差7.3 空白试验空白试验相对丰度（基峰）50%20%至 50%10%至 20%10%允许的相对偏差许的相对许的相对许的相对许的相对GB 23200.10420163除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。8 8结果计算和表述结果计算和表述用色谱数据处理系统或按式(1)计算试样中2甲4氯和2甲4氯丁酸残留含量，计算结果需扣除空白值。mVCAXsisiii.（1）式中：X试样中2甲4氯和2甲4氯丁酸残留量，单位为毫克每千克，mg/kgA样液中2甲4氯和2甲4氯丁酸的峰面积；V样品最终定容体积，单位为毫升，mL；As2甲4氯和2甲4氯丁酸标准工作液的峰面积；C2甲4氯和2甲4氯丁酸标准工作液的浓度，单位为微克每毫升，g/mL；m最终样液代表的试样质量，单位为克，g。注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9 9精密度精密度9.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录C的要求。9.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录 D 的要求。1010定量限和回收率定量限和回收率10.1 定量限定量限本方法定量线为：0.01 mg/kg。10.2 回收率回收率分别在牛肉、猪肉香肠、鱼肉、鸡肉和牛肉罐头样品中添加2甲4氯、2甲4氯丁酸，添加浓度及其回收率参见附录E。GB 23200.10420164附录附录A A（资料性附录）（资料性附录）质谱参数质谱参数A.液相色谱-质谱/质谱参数a)气帘气压力（CUR）：15 Psi（氮气）；b)离子源喷雾电压（IS）：-4500V；c)雾化温度（TEM）：550oC；d)雾化气压力（GAS1）：55 Psi（氮气）；e)加热辅助气（GAS2）：80 Psi（氮气）；f)碰撞气流速比（CAD）：7；g)其他参数见表 A。表 AMCPA 和 MCPA 选择离子和质谱参数序号化合物参考保留时间定性离子对去簇电压(DP)/V碰撞气能量(CE)/V1MCPA1.90198.7/140.8*-42-14200.9/142.9-40-192MCPB2.10226.9/140.9*-40-11228.9/142.9-35-12*为定量离子对1）非商业性声明：A 中所列参数是在 API 4000 Plus 质谱/质谱仪上完成的，此处列出的实验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的仪器。GB 23200.10420161附录附录 B B（资料性附录）（资料性附录）图 B.1MCPA 标准品 LC-MS/MS MRM 图图 B.2MCPB 标准品 LC-MS/MS MRM 图GB 23200.10420162附附录录 C（规范性附录）（规范性附录）实验室内重复性要求实验室内重复性要求表表C.1 实验室内重复性要求实验室内重复性要求被测组分含量被测组分含量mg/kg精密度精密度%0.001360.0010.01320.010.1220.1118114GB 23200.10420163附附录录 D（规范性附录）（规范性附录）实验室间实验室间再现性要求再现性要求表表D.1 实验室间再现性要求实验室间再现性要求被测组分含量被测组分含量mg/kg精密度精密度%0.001540.0010.01460.010.1340.1125119GB 23200.10420164附录附录E E（资料性附录）（资料性附录）不同基质中不同基质中MCPAMCPA和和MCPBMCPB添加浓度及回收率添加浓度及回收率表表E.1不同基质中不同基质中MCPAMCPA和和MCPBMCPB添加浓度及回收率添加浓度及回收率平均回收率（%）MCPAMCPB添加浓度（mg/kg）添加浓度（mg/kg）0.010.050.10.010.050.1牛肉91.5101.793.887.5100105.2猪肉香肠107.698.2102.477.178.995.6鱼肉94.884.382.493.382.782.3鸡肉94.897.099.590.795.595.9牛肉罐头91.089.693.995.599.998.0.