GBT 16345-1996 饮料中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定.pdf

G s/T 1 6 3 4 5-1 9 9 6前台A 本标准非等效采用国外标准。本标准的附录 A是提示的附录。本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准负责起草单位：卫生部食品卫生监督检验所；参加起草单位：北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人：杨祖英、张平伟、孙淳、姚孝元、郑兰波。本标准由卫生部委托技术归口 单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华 人 民共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 6 3 4 5 一 1 9 9 6饮料中乙酸磺胺酸钾（安赛蜜）的测定D e t e r mi n a t i o n o f a c e s u l f a me K i n b e r e r a g e1 范围 本标准规定了饮料中乙酞磺胺酸钾的测定方法。本标准适用于汽水、可乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酞磺胺酸钾的测定。也适用于糖精钠的测定。本法取样量为2.5 g 时，最低检出限为乙 酞磺胺酸钾、糖精钠各5 0 m g/k g(L),2 原理 样品中乙酞磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相柱 c,，分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。3 试剂 有机溶剂需重蒸。3.1 甲醇：分析纯。3.2 乙睛：分析纯。3.3 0.0 2 m o l/L硫酸钱溶液：称取硫酸按2.6 4 2 g，加水溶解至1 0 0 0 m L o3.4 硫酸溶液：1 0%。3.5 中性氧化铝：层析用，1 0 0-2 0 0目。3.6 乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准储备液：精密称取乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.1 0 0 0 g，用移动相溶解后移入1 0 0 m L容量瓶中，并用移动相稀释至刻度，即含乙酞磺胺酸钾、糖精钠各1 m g/m L的溶液。3.7 乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准使用液：吸取乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准储备液2 m L于5 0 m L 容量瓶，加移动相至刻度，然后分别吸取此液1 m L,2 mL,3 m L,4 m L,5 m L于1 0 rn L容量瓶中，各加移动相至刻度，即得各含乙 酞磺胺酸钾、糖精钠0.0 0 4 m g/m L,0.0 0 8 m g/rn L,0.0 1 2 m g/m L,0.0 1 6 m g/m L,0.0 2 0 m g/m L 的混合标准液系列。3.8 移动相：0.0 2 m o l/L硫酸铁(7 4 0 -8 0 0 m L)甲醇(1 7 0-1 5 0 m L)乙睛(9 0 5 0 m L)+1 0 0 oH,S O,(1 mL)。4 仪器4.4.高效液相色谱仪。超声清洗仪（溶剂脱气用）。离心机。抽滤瓶。G 3 耐酸漏斗。微孔滤膜：0.4 5 r m,层析柱，用1 0 m L注射器筒代替较好，内装3 c m高的中性氧化铝。曰10几月月月CU，1月月中华人民共和国卫生部 1 9 9 6 一 0 6 一 1 9 批准1 9 9 6 一 0 9 一 0 1 实施G s/T 1 6 3 4 5 一 1 9 9 65 分析步骤5.，样品处理5.1.1 汽水：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取样品2.5 m L于2 5 m L容量瓶中。加移动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液备作H P L C分析用。5.1.2 可乐型饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧化碳的样品2.5 m L,通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集2 5 m L洗脱液，摇匀后超声脱气，此液备作 H P L C分析用。5.1.3 果茶、果汁类食品：吸取2.5 m L样品，加水约2 0 m L混匀后，离心1 5 m in(4 0 0 0 r/m i n)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集洗脱液2 5 m L，混匀后，超声脱气，此液作 H P L C分析用。5.2 测定5.2.1 H P L C参考条件 分析柱：S p h e r i s o r b C,8,4.6 m m X1 5 0 m m，粒度 5 p m,移动相：0.0 2 m o l/L硫酸铁(7 4 0 8 0 0 m L)甲醇(1 7 0.1 5 0 m L)乙睛(9 0 -5 0 m L)+1 0 0 oH 2 S 0 4(1 mL)。波长：2 1 4 n m,流速：0.7 m L/m i n o5.2.2 标淮曲线：分别进含乙酸磺胺酸钾、糖精钠0.0 0 4 m g/m L,0.0 0 8 m g/m L,0.0 1 2 m g/m I.,0.0 1 6 m g/m L,0.0 2 0 m g/m L混合标准溶液各1 0 ti L，进行H P L C分析，然后以峰面积为纵坐标，以乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标，画标准曲线。5.2.3 样品测定：进5.1 项下的样品处理后的样品溶液1 0 I cL,测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中乙酸磺胺酸钾、糖精钠的量。H P L C色谱图如下：1 一乙酸磺胺酸钾；2 一糖精钠；3 一咖啡因t 4 一天门冬酸苯丙氨酸甲 醋 图 1 H P L C色谱 图G s/T 1 6 3 4 5 一 1 9 9 6结果计算1 0 0 0（1）m XX 1 0 0 0X一矶叭式中：X样品中乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量，g/k g(g/L);由标准曲线上查得进样液中乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量，m g/m L;V,样品稀释液总体积，m L;V Z H P L C测定时进样的体积，m L;m样品质量，9.6.2 检出限 仪器检出限0.0 4 t.g；方法检出限：乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.0 0 4 m g/m L(g)，标准曲线范围乙酞磺胺酸钾、糖精钠各为0.0 0 4 m g/m L -0.0 2 0 m g/m L。方法回收率为8 8.0 0 0 1 0 5 0 0，平均回收率为9 2.1 2%,S x=4.8，相对标准差（R.S.D)=5.0%.G B/T 1 6 3 4 5 一 1 9 9 6附录A（提示的附录）方法评价A 1 方法评价 本标准规定了用高效液相法测定饮料中乙酞磺胺酸钾、糖精钠，并能同时测定咖啡因、天门冬酞苯丙氨酸甲酷，且简化样品处理，国内外未见同时测定这四种物质的报导。A 2 方法验证A 2.1 柱层析洗脱液的研究 样品通过中性氧化铝小柱后，比较了水、移动相两种洗脱剂，结果表明水不能洗脱乙酞磺胺酸钾、糖精钠，而移动相能洗脱乙酞磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酞苯丙氨酸甲醋。A 2.2 乙酞磺胺酸钾、糖精钠在中性氧化铝柱上流出曲线 吸取1 0 0 m g/L的加标乙酞磺胺酸钾、糖精钠的可乐，通过已用少量水润湿的中性氧化铝小柱，然后以流动相洗脱，连续收集 7 管，每管 5 m L，用 H P L C测定每管中乙酞磺胺酸钾、糖精钠量。结果表明，从第4 管起均未检出乙酞磺胺酸钾、糖精钠。A 2.3 H P L C移动相的研究 本标准研究了乙酸按缓冲液甲醇、乙酸馁缓冲液异丙醇系统，硫酸钱缓冲液甲醇系统，试验结果表明硫酸按缓冲液甲醇系统能分离乙酞磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酸苯丙氨酸甲醋。见表 A l。表 A l 移动相试验表移动相R,乙 酞磺胺酸钾糖精钠咖啡因天门冬酸苯丙氨酸甲酌0.0 2 m o l/L硫酸按甲醇+1 0 0 0 硫酸(1)7 0 0 3 0 0 十 1(2)7 2 0 2 8 0+1(3)7 5 0 十2 5 0+13.0 1 02.8 7 03.2 9 23.6 3 73.4 7 94.6 2 29.0 0 21 1.1 9 71 3.9 6 01 0.8 7 01 3.58 21 6.32 00.0 2 m o l/L硫酸钱甲醇乙腊+1 0 硫酸(4)7 5 0 十2 0 0+5 0+1(5)7 4 0+1 7 0+9 0-x-13.3 2 93.9 6 94.4 3 55.0 5 09.7 3 49.9 1 51 4.5 2 01 5.6 2 0 从表 A l 看出移动相（5)较好。A 2.4 标准曲线 在试验条件下，取不同浓度的乙酞磺胺酸钾、糖精钠混合标准使用液。.0 0 4 m g/m l.,0.0 0 8 m g/m L,0.0 1 2 m g/m L,0.0 1 6 m g/m L,0.0 2 0 m g/m L，各进样1 0 fi L，进行H P L C分析，然后以 峰面积对乙酞磺胺酸钾、糖精钠浓度作图，画标准曲线。乙酞磺胺酸钾的回归方程为r=0.9 9 8,Y-9 9 2 6 4.4+3.3 4 X 1 0 7 X;糖精钠的回归方程为r=0.9 9 8,Y=1 6 1 9 4 4 十7.2 6 X 1 0 X。乙酞磺胺酸钾、糖精钠的线性范围 是。-0.0 2 0 m g/m l,.A 2.5 回收试验 选择不含乙酞磺胺酸钾、糖精钠的汽水、果汁、果茶进行加标试验，分别加入5 0 m g/L,1 0 0 m g 几 的G B/T 1 6 3 4 5 一 1 9 9 6两个不同浓度，依法操作，测得回收率为8 8 0 o-1 0 5 0 o，平均回收率为9 2.1 2 0 o,S x=4.8，相对标准差(R.S.D)5.O N。A 3 验证结果 本标准委托北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所验证，验证时采用 已加入1 0 0 m g/L 的乙酞磺胺酸钾、糖精钠的可乐饮料为统一样品。两单位平均测得值为：乙酞磺胺酸钾浓度为1 0 5.6 m g/L，回收率为 1 0 5.6 0 o,S、一4.9 7，相对标准差（R.S.D）为 4.7 1 0 o；糖精钠测得浓度为9 8.3 m g/L，回收率为9 8.3 0 o,S x=2.4 5，相对标准差（R.S.D）为2.4 9 0 0 0