GB 1886.174-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 食品工业用酶制剂.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 6食品安全国家标准食品添加剂 食品工业用酶制剂2 0 1 6-0 8-3 1发布2 0 1 7-0 1-0 1实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 6 前 言 本标准代替G B2 5 5 9 42 0 1 0 食品安全国家标准 食品工业用酶制剂,G B8 2 7 62 0 0 6 食品添加剂 糖化酶制剂,G B2 0 7 1 32 0 0 6 食品添加剂-乙酰乳酸脱羧酶制剂,G B8 2 7 52 0 0 9 食品添加剂-淀粉酶制剂。本标准与G B2 5 5 9 42 0 1 0相比,主要变化如下:增加了酶活力的术语和定义;增加了产品分类、理化要求;在附录中给出了部分酶制剂的酶活力测定方法。G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 61 食品安全国家标准食品添加剂 食品工业用酶制剂1 范围本标准适用于G B2 7 6 0允许使用的食品工业用酶制剂。2 术语和定义2.1 食品工业用酶制剂由动物或植物的可食或非可食部分直接提取,或由传统或通过基因修饰的微生物(包括但不限于细菌、放线菌、真菌菌种)发酵、提取制得,用于食品加工,具有特殊催化功能的生物制品。注:商品化的酶制剂产品允许加入易于产品贮存、使用的配料成分。2.2 酶活力酶在一定条件下催化某一特定反应的能力,即为酶活力,是表达酶制剂产品的一个特征性专属指标。2.3 抗菌活性抑制或杀灭微生物的能力。3 产品分类按产品形态分为固体剂型和液体剂型两类。4 技术要求4.1 原料要求4.1.1 用于生产酶制剂的原料必须符合良好生产规范或相关要求,在正常使用条件下不应对最终食品产生有害健康的残留污染。4.1.2 来源于动物的酶制剂,其动物组织必须符合肉类检疫要求。4.1.3 来源于植物的酶制剂,其植物组织不得霉变。4.1.4 对微生物生产菌种应进行分类学和(或)遗传学的鉴定,并应符合有关规定。菌种的保藏方法和条件应保证发酵批次之间的稳定性和可重复性。4.2 产品要求4.2.1 理化指标产品酶活力在标示值的8 5%1 1 5%。G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 62 注:本标准附录A给出的酶活力测定方法供参考。企业可按相应标准中给出的或企业规定的方法测定。4.2.2 污染物限量污染物限量应符合表1的规定。表1 污染物限量项 目指 标检验方法铅(P b)/(m g/k g)5.0G B5 0 0 9.7 5或G B5 0 0 9.1 2总砷(以A s计)/(m g/k g)3.0G B5 0 0 9.1 14.2.3 微生物指标微生物指标应符合表2的规定。表2 微生物指标项 目指 标检验方法菌落总数/(C F U/g或C F U/m L)5 00 0 0G B4 7 8 9.2大肠菌群/(C F U/g或C F U/m L)3 0G B4 7 8 9.3大肠埃希氏菌C F U/g或C F U/m L1 0M P N/g或M P N/m L3.0G B4 7 8 9.3 8沙门氏菌(2 5g或2 5m L)不得检出G B4 7 8 9.4 注:经基因重组技术得到的微生物生产的酶制剂不应检出生产菌。4.2.4 抗菌活性微生物来源的酶制剂不得检出抗菌活性,抗菌活性按G B4 7 8 9.4 3执行。G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 63 附 录 A酶活力测定方法A.1 一般规定本标准所用试剂和水,在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和G B/T6 6 8 2规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按G B/T6 0 1、G B/T6 0 2和G B/T6 0 3的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。A.2 -淀粉酶活力的测定A.2.1 -淀粉酶能水解淀粉分子链中的-1,4葡萄糖苷键,将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖,使淀粉黏度迅速下降的酶。A.2.2 -淀粉酶活力A.2.2.1 中温-淀粉酶活力单位1g固体酶粉(或1m L液体酶),于6 0、p H6.0条件下,1h液化1g可溶性淀粉,即为1个酶活力单位,以U/g(U/m L)表示。A.2.2.2 耐高温-淀粉酶活力单位1g固体酶粉(或1m L液体酶),于7 0、p H6.0条件下,1m i n液化1m g可溶性淀粉,即为1个酶活力单位,以U/g(U/m L)表示。A.2.3 原理-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖,而使淀粉对碘呈蓝紫色的特性反应逐渐消失,呈现棕红色,其颜色消失的速度与酶活性有关,据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。A.2.4 试剂和材料A.2.4.1 碘。A.2.4.2 碘化钾。A.2.4.3 原碘液:称取1 1.0g碘和2 2.0g碘化钾,用少量水使碘完全溶解,定容至5 0 0m L,贮存于棕色瓶中。A.2.4.4 稀碘液:吸取原碘液2.0 0m L,加2 0.0g碘化钾用水溶解并定容至5 0 0m L,贮存于棕色瓶中。A.2.4.5 可溶性淀粉溶液(2 0g/L):称取2.0 0 0g(精确至0.0 0 1g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中,用少量水调成浆状物,边搅拌边缓缓加入7 0m L沸水中,然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯,洗液倒入其中,搅拌加热至完全透明,冷却定容至1 0 0m L。溶液现配现用。注:可溶性淀粉应采用酶制剂分析专用淀粉。A.2.4.6 磷酸缓冲液(p H6.0):称取4 5.2 3g磷酸氢二钠(N a2H P O41 2 H2O)和8.0 7g柠檬酸(C6H8O7H2O),用水溶解并定容至10 0 0m L。用p H计校正后使用。G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 64 A.2.4.7 盐酸溶液c(H C l)=0.1m o l/L。A.2.5 仪器和设备A.2.5.1 分光光度计。A.2.5.2 恒温水浴:精度 0.1。A.2.5.3 自动移液器。A.2.5.4 试管:2 5mm 2 0 0mm。A.2.5.5 秒表。A.2.6 分析步骤A.2.6.1 待测酶液的制备称取试样1g 2g(精确至0.0 0 01g)或准确吸取1.0 0m L,用少量磷酸缓冲液充分溶解,将上清液小心倾入容量瓶中,若有剩余残渣,再加少量磷酸缓冲液充分研磨,最终样品全部移入容量瓶中,用磷酸缓冲液定容至刻度,摇匀。用四层纱布过滤,滤液待用。注:待测中温-淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在3.4U/m L 4.5U/m L范围内,待测耐高温-淀粉酶活力控制酶浓度在6 0U/m L 6 5U/m L范围内。A.2.6.2 测定a)吸取2 0.0m L可溶性淀粉溶液于试管中,加入磷酸缓冲液5.0 0m L,摇匀后,置于6 0 0.2(耐高温-淀粉酶制剂置于7 00.2)恒温水浴中预热8m i n;b)加入1.0 0m L稀释好的待测酶液,立即计时,摇匀,准确反应5m i n;c)立即用自动移液器吸取1.0 0m L反应液,加到预先盛有0.5m L盐酸溶液 和5.0 0m L稀碘液的试管中,摇匀,并以0.5m L盐酸溶液和5.0 0m L稀碘液为空白,于6 6 0n m波长下,用1 0mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。根据吸光度查表附录B,求得测试酶液的浓度。A.2.6.3 结果计算A.2.6.3.1 中温-淀粉酶制剂的酶活力中温-淀粉酶制剂的酶活力X1,单位为U/m L或U/g,按式(A.1)计算:X1=cn(A.1)式中:c 测试酶样浓度,单位为U/m L或U/g;n 样品的稀释倍数。所得结果表示至整数。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。A.2.6.3.2 耐高温-淀粉酶制剂的酶活力耐高温-淀粉酶制剂的酶活力X2,以U/m L或U/g计,按式(A.2)计算:X2=cn1 6.6 7(A.2)式中:c 测试酶样的浓度,单位为U/m L或U/g;n 样品的稀释倍数;G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 65 1 6.6 7 根据酶活力定义计算的换算系数。所得结果表示至整数。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对误差不得超过5%。A.3 葡糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)活力的测定(黑曲霉及其变异株来源)A.3.1 葡糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)以淀粉为底物,在一定条件下从淀粉的非还原性末端开始水解-1,4、-1,6、-1,3葡萄糖苷键产生葡萄糖的淀粉葡萄糖苷酶。A.3.2 葡糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)活力1m L酶液或1g酶粉在4 0、p H4.6的条件下,1h水解可溶性淀粉产生1m g葡萄糖,即为一个酶活力单位,以U/m L(或U/g)表示。A.3.3 试剂和材料A.3.3.1 0.0 5m o l/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液(p H4.6):称取乙酸钠(C H3C O O N a3 H2O)6.7g,吸取冰乙酸2.6m L,用水溶解并定容至10 0 0m L。上述缓冲溶液的p H,应使用酸度计加以校正。A.3.3.2 0.0 5m o l/L硫代硫酸钠标准滴定溶液。A.3.3.3 0.1m o l/L碘标准溶液。A.3.3.4 0.1m o l/L氢氧化钠溶液。A.3.3.5 2m o l/L硫酸溶液:吸取分析纯浓硫酸(相对密度1.8 4)5.6m L缓缓加入适量水中,冷却后,用水定容至1 0 0m L,摇匀。A.3.3.6 2 0 0g/L氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠2 0g,用水溶解,并定容至1 0 0m L。A.3.3.7 2 0g/L可溶性淀粉溶液:称取可溶性淀粉2g 0.0 0 1g,然后用少量水调匀,缓缓倾入已沸腾的水中,煮沸、搅拌直至透明,冷却,用水定容至1 0 0m L。此溶液需当天配制。注:可溶性淀粉应采用酶制剂分析专用淀粉。A.3.4 仪器和设备A.3.4.1 分析天平:精度0.2m g。A.3.4.2 酸度计:精度0.0 1p H。A.3.4.3 分析天平:精度0.2m g。A.3.4.4 恒温水浴:4 0土0.1。A.3.4.5 连续多档分配器(移液枪)。A.3.4.6 磁力搅拌器。A.3.5 分析步骤A.3.5.1 待测酶液的制备A.3.5.1.1 液体酶:使用连续多档分配器准确吸取适量酶样,移入容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度,充分摇匀,待测。A.3.5.1.2 固体酶:用5 0m L小烧杯准确称取适量酶样,精确至1m g,用少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液溶解,并用玻璃棒仔细捣研,将上层清液小心倾入适当的容量瓶中,在沉渣中再加入少量缓冲溶液,如此反复捣研3次G B1 8 8 6.1 7 42 0 1 66 4次,取上清液,最后全部移入容量瓶中,用缓冲溶液定容,磁力搅拌3 0m i n以充分混匀,取上清液测定。注:1.制备待测酶液时,样液浓度应控制在滴定空白和样品时消耗0.0 5m o l/L硫代硫酸钠标准滴定溶液的差值在4.5m L 5.5m L范围内(酶活力约为1 2 0U/m L 1 5 0U/m L)。2.液体酶根据产品特性也可称取,按克计算。A.3.5.2 测定取A、B两支5 0m L比色管,分别加入可溶性淀粉溶液2 5m L和乙酸-乙酸钠缓冲溶液5m L,摇匀。于4 0 0.2的恒温水浴中预热5m i n 1 0m i n。在B管中加入待测酶液2.0m L,立即记时,摇匀。在此温度下准确反应3 0m i n后,立即向A、B两管中各加氢氧化钠溶液0.2m L,摇匀,同时将两管取出,迅速用水冷却,并于A管中补加待测酶液2.0m L(作为空白对照)。吸取上述A、B两管中的反应液各5.0m L,分别于两个碘量瓶中,准确加入碘标准溶液1 0.0m L,再加氢氧化钠溶液1 5m L,边加边摇匀,并于暗处放置1 5m i n,取出。用水淋洗瓶盖,加入硫酸溶液2m L,用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定蓝紫