GBT 14965-1994 食物中氨基酸的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家标 准食 物 中 氨 基 酸 的 测 定 方 法G 1 3/T 1 4 9 6 5 一 9 4Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f a mi n o a c i d s i n f o o d s，主题内容与适用范围 本标准规定了用氨基酸自 动分析仪测定食物中氨基酸的方法。本标准适用于食物中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、撷氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定。其最低检出限为1 0 p m o l.本标准不适用于蛋白 质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的氨基酸测定。2 原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与布三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。3 试荆 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。3.1 浓盐酸:优级纯。3.2 6 m o l/L盐酸:浓盐酸(3.1)与水1:1 混合而成。3.3 苯酚:须重蒸馏。3.4 混合氨基酸标准液(仪器制造公司出 售);0.0 0 2 5 0 m o l/L,I5 缓冲液3.5.1 p H 2.2 的柠檬酸钠缓冲液:称取1 9.6 g 柠檬酸钠(N a,CH,O,2 H 2 0)和1 6.5 m L 浓盐酸加水稀释到1 0 0 0 m L，用浓盐酸或5 0%的氢氧化钠溶液调节p H至2.2.15.2 p H 3.3 的柠像酸钠缓冲液:称取1 9.6 g 柠檬酸钠和 1 2 m L浓盐酸加水稀释到1 0 0 0 m L，用浓盐酸或5 0%的氢氧化钠溶液调节p H至3.3.3.5.3 p H 4.。的柠檬酸钠缓冲液:称取1 9.6 g 柠檬酸钠和9 m L浓盐酸加水稀释到 1 0 0 0 m l，用浓盐酸或5 0%的氢氧化钠溶液调节p H至4.。3.5.4 P H 6.4 的柠檬酸钠缓冲液:称取 1 9.6 g柠檬酸钠和 4 6.8 g氯化钠(优级纯)加水稀释到1。mL，用浓盐酸或5 0%的氢氧化钠溶液调节p H至 6.4.I6 命三酮溶液1 6.1 p H 5.2 的 乙 酸 铿 溶 液:称 取 氢 氧 化 ff(L IO H H 20)1 6 8 g，加 入 冰 乙 酸(优 级 纯)2 7 9 m 么加 水 稀释到1 0 0 0 m L，用浓盐酸或5 0%的氢氧化钠溶液调节p H至5.2,3.6.2 茹三酮溶液:取1 5 0 m L 二甲 基亚?A(C,H s O S)和乙 酸锉溶液(3.6.1)5 0 m L加入4 g 水合苟三酮(C,H,0 6。H B O)和0.1 2 g 还原苟三酮(C,o H l o O 6 2 H 2 0)搅拌至完全溶解。I了 高纯氮气:纯度9 9.”%。中华人民共和国卫生部1 9 9 4 一 0 3-1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0，实施c a/T 1 4 9 6 5 一9 43.8 冷冻剂:市售食盐与冰按 1:3 混合仪器和设备4.1 真空泵。4.2 恒温干燥箱。4.3 水 解管:耐 压螺盖玻璃管或硬质玻 璃管，体积2 0 -3 0 m L。用去离子 水冲洗干 净并烘千4.4 真空干燥器(温度可调节)。4.5 氨基酸自动分析仪。5 样品处理 样品采集后用匀浆机打成匀浆(或者将样品尽量粉碎)于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。6 分析步骤6.1 称样 准确称取一定量样品，精确到。.0 0 0 1 g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在1 0-2 0 m g 范围内;均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可 适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品放于水解管中。6.2 水解 在水解管内加6 m o l/L盐酸(3.2)1 0 1 5 m L(视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样品(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚(3.3)3-4 滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3 -5 m i n，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近0 p s i)，然后充人高纯氮气;再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在1 1 0 士1 的恒温干燥箱内，水解2 2 h 后，取出冷却 打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管.将水解液全部转移到5 0 m L容量瓶内用去离子水定容。吸取滤液1 m L于5 m L容量瓶内，用真空干燥器在4 0-5 0 干燥，残留物用1-2 m L水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1 m L p H 2.2 的缓冲液(3.5.1)溶解，供仪器测定用了 测定 准确吸取。.2 0 0 m L混合氨基酸标准(3.4)，用p H 2.2 的缓冲液(3.5.1)稀释到 5 m l-，此标准稀释液浓度为5.0 0 n m o l/5 0 p L，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量。8 计算 X 矗 X F X V X M-X 1 0 X 1 0 0式中:X 样品氨基酸含量，g/1 0 0 g;。样品测定液中氨基酸含量,n m o l/5 0 V L;F 样品稀释倍数;V 水解后祥品定容体积，mL;M氨基酸分子量;G B/r 1 4 9 6 5 一9 4阴 样品质量,g;毙 一麒瓶到瀚服麒，基 酸 粗,n m o l/m L;1 0 将样品含量由n g 折算成g的系数。注:样品氮基酸含量在1.0 0 g/1 0 0 g 以下.保留两位有效数字;含量在1.0 0 盯1 0 0 g 以上，保留三位有效数字 十六种氮基酸分子量 天冬氮酸:1 3 3.1:苏氨酸:1 1 9.1 3 丝氮酸 1 0 5.卜 谷氮酸:1 4 7.1;脯氨酸,1 1 5.1;甘氮酸:?5，卜 丙饭酸:8 9.h绷氨酸:1 1 7.2;蛋氮酸:1 4 9.2;异亮氨酸:1 3 1.2;亮氨酸:1 3 1.2:璐氮酸:1 8 1.2;苯丙氛酸:1 6 5.2;组氨酸:1 5 5.2,赖氮酸 1 4 6.2;精氛酸:1 7 4.2,9 允许差 同实验室平行测定或连续两次测定结果相对偏差绝对值镇1 2%,1 0 其他1 0.1 测定条件(以B e c k m a n-6 3 0 0 型氨基酸自动分析仪为例)缓冲液流量:2 0 m L/h t 布三酮流量:1 0 m L/h;柱温:5 0,6 5 和 7 0 1C;色谱柱:2 0 c m;分析时间:4 2 m i n,1 0.2 标准出峰顺序和保留时间G B/T 1 4 9 6 5 一 9 4出峰顺序保留时间，mi n一 出 峰 顺 序保留时间，m m12345678天冬氨酸苏氨酸丝氨酸谷氨酸脯氮酸甘氮酸丙氨酸绷氮酸5.556.607.0 98.7 29.6 31 2.2 41 3.1 01 6.6 591 01 11 21 31 41.51 6蛋氨酸异亮氨酸亮氨酸酷氮酸苯丙氨酸组氨酸赖氮酸精氮酸1 9.6 32 1.2 42 2.0 62 4.5 22 5.7 63 0.4 13 2.5 74 0.7 51 0.3 标准图谱1 9.6 33 0.413 2.5 24 8 2G B/T 1 4 9 6 5 一 9 4 附录A其他型号氮签酸 自动分析仪特点 (参考件)A 1 测定条件 缓冲液流量,mL/mi n 苟三酮流量，m L/m i n 柱温，C 色谱柱，m m 分析时间，m i n 最低检出 限，p m o lA 2 标准出峰顺序和保留时间HI TACHI 8 3 5-5 0 0.2 2 5 0.3 5 34X 1 5 0 5 0 3 0HI TAC HI L-8 5 0 0 0.4 0.3 5 7 4.6 X6 0 3 0 1 0HI TACHI 8 3 5-5 0HI TACHI L-8 5 0 0 出峰顺序1 天冬氨酸2 苏氨酸3 丝氨酸4 谷氨酸5 脯氨酸6 甘氨酸7 丙氨酸8氨酸9 蛋氨酸1 0 异亮氨酸1 1 亮氨酸1 2 酪氨酸1 3 苯丙氨酸1 4 赖氨酸1 5 组氨酸1 6 精氨酸保留时间，mi n9.8 81 0.8 61 1.8 81 3.5 21 4.3 41 8.3 81 9.7 72 2.9 02 4.6 42 6.9 72 8.4 13 0.1 43 1.9 03 5.5 44 0.1 74 8.5 35.9056舱巧86250838587886836498乐7.乐8.111213l6201416171819212428铭 3G B/T 1 4 9 6 5 一 9 4标准图谱A3目N-NNa.HI TA CHI 一 8 3 5呀卜。NlNZ-卜毖。.0门.峨田1。盆b.HI TA C HI L一 8 5 0 0图 AlG B/r 1 4 9 6 5 一 9 4附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准主要起草人贾健斌、赵熙和。本标准由卫生部委托技术归口 单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。