GBT 15400-1994 饲料中色氨酸测定方法 分光光度法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲 料 中 色 氨 酸 测 定 方 法 分光光度法G B/T 1 5 4 0 0 一 9 4D e t e r mi n a t i o n o f t r y p t o p h a n i n f e e d s t u f f s -S p e c t r o p h o t o me t r y1 主题内容与适用范围 本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2 引用标准 G B 6 4 3 3 饲料粗脂肪测定方法3 原理 饲料中 蛋白 质 经 碱水 解 后，降 解 成多 肤 和 游 离 的 氨 基 酸，在 酸 性 介质 中，氧 化 剂 存 在 下，色 氦 酸 U 9 1环与 对 二 甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。4 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4.1 硫酸(G B 6 2 5)溶液、c(1/2 H2 S O 4)=2 1.2 m o t/L 垦取5 8 9 m l 硫酸徐徐加入约3 5 0 m L水中，冷却后用水稀释至1 L.4.2 1%对二甲 氨基苯甲醛溶液:1.0 g 对二甲氨基苯甲醛溶于2 1.2 m o t/L硫酸(4.1)中并定容1 0 0 m L,4.3 0.2%亚硝酸钠(G B 6 3 3)溶液(m/V),4.4 l o/氢氧化钾(G B 2 3 0 6)溶液(m/V)4.S l,色氨酸，色谱纯。4.6 1,色氨酸标准溶液:准确称取2 5.0 m g L 一 色氨酸于小烧杯中，加少量0.1 M O l/I氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到2 5 0 ml 棕色容量瓶中，用水定容，浓度为1 0 0 p g/m L 注:本标准溶液4 冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变.5 仪器、设备分析天平:感量。.1 m g,分光光度计。离心机:转速4 0 0 0 r/m i n,实验室用粉碎机51525354国家技术监督局 1 9 9 4 一 1 2 一 3 0 批准1 9 9 5 一 0 7 一 0 1 实施G B/T 1 5 4 0 0 一 9 4培养箱。容觉瓶:2 5 m l-,5 0 mL,2 5 0 m L,1 0 in -具塞试管。刻度吸管:。.5 mL,2 m l-5 mL,2 5 ml。试样的制备八匕7口OU乐乐55.66.1 选取有代表性的试样，按四分法缩分至2 0 0 g，粉碎，全部通过。.2 5 m m孔径筛(6。目)6.2 按G B 6 4 3 3 脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。了 分析步骤了 门皿 作曲线的绘制7.1.1 吸取色氨酸浓度为1 0 0 p g/m L的标准溶液(4.6)5.0 0,7.5 0,1 0.0 0,1 2.5 0,1 5.0 0,1 7.5 0 m L分别置于2 5 m l,棕色容量瓶中 用水定容，摇匀。溶液浓度分别为2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0 p g/m 工 一。7.1.2 吸取各浓度溶液(7.1.1)1 m L，分置具塞试管(5.7)中，空白 管加1 m L水。向 每支试管内加入氢氧化钾溶液(4.4)1 m l，混匀，将试管放入冷水盆中，加5 m L对二甲氨基苯甲醛溶液(4.2).从冷水盆中取出试管，摇匀，在室温(2 0-3 0 C，下同)放置3 0 m i n,7.1.3 向上述每支试管内加。.2 m L亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置2 5 m i n,7.1.4 以空白管调零，在5 9 0 n m波长下，以1 c m光径测定各溶液吸光度值。7.1.5 以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式7.2 样品测定7.2.1 称样:按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精确至0 _ l m g,7.2.2 水解:将试样置于5 0 m L容量瓶(5.6)中，在轻轻振摇中缓慢加入2 5 m l氢氧化钾溶液(4.4),使试样湿润且不粘壁，置于4 0 11 培养箱(3.5)中水解1 6 1 8 h,7.2.3 离心:取出水解液冷却至室温后，用水定容，播匀，取部分水解液以4 0 0 0 r/m i n转速离心1 5 mi n,7.2.4 显色:取2 m L上清液置具塞试管(5.7)中，并将试管放入冷水盆中，加入5 m L对二甲氨基苯甲醛溶液(4.2)，摇匀。每个试样另取2 m L上清液于具塞试管(5.7)中，加5 m 1硫酸溶液(4.1)作为样品空白，摇匀，室温放置3 0 m i n。然后向每支试管内加入。.2 m L亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置2 5 mi n,7.2.5 比色:以样品空白 调零，在5 9 0 n m波长处1 c m光径测定样品溶液的吸光度值。8 分析结果的表述计算公式色氨酸(脱脂样)(%)A X 2 5M X 1 0 X 1 0 0一色氨酸(原样)(%)A X 2 5X(1 一 F)一MX1 0,X 1 0 0。脱脂试样质量,m g;A 从工作曲线上查得色氨酸含量,K g;F-月 旨 肪分率。结果的表示1中2乐式8.G a/T 1 5 4 0 0 一 9 4 两个 平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。试样脂肪含量小于4%时，式(1)和(2)所得结果在允许偏差之内8.3 重复性 两个平行样品测定值的相对偏差，当色氨酸含量小于。.1%时.大于 3%;大于。5 0%时，不大于2%0不大于 4%;0.1 0%一0.5 0%时，不G B/T 1 5 4 0 0 一 9 4At录样附称(参考件)根据样品蛋白质、色氨酸含量确定称样量，经试验研究建议不同饲料称样量如下:蛋白质含量，%饲料种类称样量,m g1 0以下高粱、玉米65 0-7 0 01 1 2 0小麦、大麦、糠数、糠饼、配合料、混合料、各种叶粉等45 0-5 0 02 1 3 0干面抽、千粉渣、豆腐渣、杂豆、糟渣类3 5 0 -4 0 03 1-4 0棉仁饼、菜籽饼、蓖麻饼、向日 葵 饼、浓缩料2 0 0 -2 5 04 1 5 0虾粉、豆饼、芝麻饼、醉母、豆粕、花生饼、国产鱼粉1 8 0 2 0 05 0以上鱼粉、血粉、肉骨粉、蚕蛹、羽毛粉1 6 0-1 8 0 附加说明:本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农业分析标准化技术委员会归口。本标准由中国 农业科学院分析测试中心，山 西省农科院作物遗传研究所、黑龙江省 农业科学院实验技术中心、上海市农业科学院作物育种栽培研究所共同起草。本标准主要起草人崔淑文、王淑芬、郑云兰、马宗兰、马东霞。