GBT 13085-2005 饲料中亚硝酸盐的测定 比色法.pdf

I CS 6 5.1 2 0B 4 6召p i中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 3 0 8 5-2 0 0 5 代替 GB/T 1 3 0 8 5-1 9 9 1饲料中亚硝酸盐的测定比色法De t e r mi n a t i o n o f n i t r i t e i n f e e d-Me t h o d u s i n g c o l o r i me t r i c a n a l y s i s2 0 0 5-0 9-0 5发布2 0 0 6-0 2-0 1 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会发 布GB/T 1 3 0 8 5-2 0 0 5前言 本标准是参考了G B/T 5 0 0 9.3 3 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的 测定方法，并结合起草单位多年科研工作实践而制定的。本标准是 G B/T 1 3 0 8 5-1 9 9 1(饲料中亚硝酸盐的测定方法 的修订本。本标准与G B/T 1 3 0 8 5-1 9 9 1 的主要技术差异是:(1)改变了蛋白质沉淀剂，在弱碱性条件下，用硫酸锌沉淀样品中蛋白质;(2)用氯化按缓冲液和乙酸溶液调节显色反应体系的p H值，因而提高了过滤速度，节约了样品预处理时间，提高了显色稳定性。本标准自实施之日起，代替GB/T 1 3 0 8 5-1 9 9 1,本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:华中农业大学。本标准主要起草人:齐德生、于炎湖、易俊东、黄炳堂。本标准 1 9 9 1 年首次发布，本次为第一次修订GB/T 1 3 0 8 5-2 0 0 5饲料 中亚硝酸盐的测定比色法范围 本标准规定了以重氮偶合比色法测定饲料中亚硝酸盐的方法。本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料及精料补充料中亚硝酸盐的测定。方法的检出限为0.6 4 mg/k g2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B/T 1 4 6 9 9.1 饲料采样3 原 理 样品在弱碱性条件下除去蛋白质，在弱酸性条件下试样中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应，生成重氮化合物.再与N-1-蔡基乙二胺偶合形成紫红色化合物，进行比色测定。4试荆 试剂不加说明者，均为分析纯试剂，水应符合GB/T 6 6 8 2 三级用水4.1 氯化钱缓冲液,1 0 0 0 mL容量瓶中加人 5 0 0 m工水，加人 2 0 m l盐酸，混匀，加人 5 0 m l-氢氧化按，用水稀释至刻度。用稀盐酸和稀氢氧化钱调节 p H至9.6.9.7 04.2 硫酸锌溶液(0.4 2 mo l/L):称取 1 2 0 g硫酸锌(Z n S 0 4 7 H,O)，用水溶解，并稀释至1 0 0 0 m l。4.3 氢氧化钠溶液(2 0 g/L):称取 2 0 g 氢氧化钠，用水溶解，并稀释至 1 0 0 0 mL e4.4 6 0%乙酸溶液 量取 6 0 0 ml乙酸于 1 0 0 0 ml.容量瓶中，用水稀释至刻度。4.5 对氨基苯磺酸溶液:称取 5 g 对氨基苯磺酸，溶于 7 0 0 m工水和 3 0 0 m l，冰乙酸中，置棕色瓶保存，1 周内有效4.6 N-1-蔡基乙二胺溶液(1 g/L):称取。.1 g N-1-蔡基乙二胺，加乙酸(4.4)溶解并稀释至 1 0 0 m工，混匀后置棕色瓶中，在冰箱内保存，1 周内有效。4.7 显色剂:临用前将 N-1-蔡基乙二胺溶液(4.6)和对氨基苯磺酸溶液(4.5)等体积混合。4.8 亚硝酸钠标准溶液:称取 2 5 0.0 m g经 1 1 5 士5 0C烘至恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移人 5 0 0 ml.容量瓶中，加 1 0 0 m L氯化钱缓冲液(4.1)，加水稀释至刻度，棍匀，在4 0C避光保存此溶液每毫升相当于5 0 0 拜 9 亚硝酸钠。4.9 亚硝酸钠标准工作液 临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液(4.8)1.0 0 m工，置于1 0 0 m工容量瓶中，加水稀释至刻 度，此溶液每毫升相当于5.0 u R 亚硝酸钠。5仪器与设备5.15.25.3分光光度计:有1 c m比色杯，可在 5 5 0 n m处测量.小型粉碎机。分析天平:感量。.。1 只。G B/T 1 3 0 8 5-2 0 0 55.4 恒温水浴锅5.5 容量瓶:1 0 0 ml.,2 0 0 mI,5 0 0 mL,1 0 0 0 ml。5.6烧杯:1 0 0 ml-,2 0 0 mL,5 0 0 ml-,5.7 吸量管;1 mL,2 ml.,S ml-,1 0 ml。5.8 移液管:l o m工。5.9 容量瓶 2 5 m工。5.1 0 长颈漏 斗:首径 7 5 mm-9 0 mm6试样 的制备 按 G B/T 1 4 6 9 9.1 采集有代表性的样品，四分法缩分至约 2 5 0 g，粉碎，过 1 mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，低温保存备用。7测定步骤7.1 试液制备 称取约5g试样，精确到。.0 0 1 g，置于 2 0 0 mL烧杯中，加 7 0 mL水和 1.2-L氢氧化钠溶液(4.3),混匀，用氢氧化钠溶液(4.3)调至p H为 8-9，全部转移至 2 0 0 m L容量瓶中，加 1 0 m l硫酸锌溶液(4.2),混匀，如不产生白色沉淀，再补滴氢氧化钠溶液(4.3)，直至产生沉淀为止，混匀，置 6 0 水浴中加热 1 0 mi n，取出后冷却至室温，加水至刻度，混匀。放置。.5 h，用滤纸过滤，弃去初滤液 2 0 mL，收集滤液备用。7.2 亚硝酸盐标准曲线的制备 吸取。,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL亚硝酸钠标准工作液(4.9)(相当于。,2.5,5,1 0,1 5,2 0,2 5 K g 亚硝酸钠)，分别置于 2 5 mL容量瓶中。于各瓶中分别加人 4.5 mL氯化钱缓冲液(4.1)，加2.5 m工 _ 乙酸(4.4)后立即加人 5.0 ml显色剂(4.7)，加水至刻度，混匀，在避光处静置2 5 m i n，用 1 c m比色杯(灵敏度低时可换 2 c m比色杯)，以零管调节零点，于波长5 3 8 n m处测吸光度，以吸光度为纵坐标，各溶液中所含亚硝酸钠质量为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。含亚硝酸盐低的试样以制备低含量标准曲线计算，标准系列为:吸取。,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0 ml.亚硝酸钠标准工作液(4.9)(相当干。,2,4,6,8,1 0 p g亚硝酸钠)。7.3测定 吸取 1 0.0 ml 一上述试液(7.1)于 2 5 mI，容量瓶中，按 7.2自“分别加人 4.5 mL氯化钱缓冲液(4.1)”起，进行显色和测量试液(7.7)的吸光度(A,).另取 1 0.0 m工试液(7.1)于2 5 m L容量瓶中，用水定容至刻度，以水调节零点，测定其吸光度(A,).从试液吸光度值A 中扣除吸光度值入、后得吸光度值A，即A=A,-A-再将 AA代人回归方程(7.2)进行计算。测定 结果计算公式 m:X V,X 1 0 0 0A二 二 二 m,X V,X I U O O .。(1)式 中:X-试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量，单位为毫克每千克(mg/k g);试样质量，单位为克(g);测定对样液中 亚硝酸盐(以 亚硝酸钠计)的 质量，单位为微克(p g);GB/T 1 3 0 8 5-2 0 0 5 V,试样处理液总体积，单位为毫升(mL);V 2测定用样液体积，单位为毫升(mL);1 0 0 0 单位换算系数。8.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到。.1 mg/k g.8.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的相对偏差:在亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)含量小于或等于 2 0 mg/k g 时，不得大于 1 0%;在亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)含量大于 2 0 mg/k g 时，不得大于5%