GBT 18246-2019 饲料中氨基酸的测定.pdf

GB/T18246-20193.2.2盐酸：优级纯。3.2.3盐酸水解溶液(6mol/L):将500mL盐酸(3.2.2)与500mL水混合，加1g苯酚，混匀。3.2.4柠檬酸钠缓冲溶液pH=2.2,c(Na+)=0.2mol/L:称取柠檬酸三钠19.6g于1000mL容量瓶中，加水溶解后加入盐酸(3.2.2)16.5mL,硫二甘醇5.0mL,苯酚1g,用水定容并过滤。3.2.5氨基酸标准储备溶液：含17种常规蛋白水解液分析用氨基酸（天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸)，各组分浓度均为2.50umol/mL,应使用有证标准溶液。3.2.6氨基酸标准工作溶液：准确移取2m的氨基酸标循储备溶液(3.2.5)置于50mL容量瓶中，以柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)定容，各氨基酸组分浓度为100nmol/m用安瓿分装密封，每支约1mL,在28下保存，有效期3个月3.2.7不同pH值和离子强度的柠檬酸钠缓冲溶液与茚三酮溶液：按照仪器说明书配制或购买。3.2.8液氮。3.3仪器设备3.3.1氨基酸自动分析仪条交爽兵带二装,和40光度检测器。3.3.2天平：感量0.1mg03.3.3空泉3.3.4唢灯。3.3.5温干燥箱：温度可达士2心3.3.6离心机：转速不低于面3.3.7旋转蒸发器或浓缩器在至温间温温精瘦，氧空度可低至3.3103P(25 mmHg)3.4样品按GB/T20195进行样晶制备，粉碎过0.25mm孔径筛，混合均匀，装入密闭容器中保存，备用。对于粗脂肪含量大于或等于5%的样品，需将脱脂后的样品风干，混匀，装入密闭容器中备用。对于粗脂肪小于5%的样品，可直接称样。3.5试验步骤3.5.1样品前处理平行做两份试验。称取试样50mg100mg(含蛋白质约7.5mg25mg,精确至0.1mg)于20mL安瓿或水解管中，准确加人10mL盐酸水解溶液(3.2.3)，置液氮(3.2.8)中冷冻，使用真空泵抽真空至7Pa(510-2mmHg)后用喷灯封口或充氮气1min后旋紧管盖。将安瓿或水解管放在110士2恒温干燥箱中，水解22h24h。冷却，混匀，开管，过滤，用移液管精确吸取适量的滤液，置于旋转蒸发器或浓缩器中，60下抽真空蒸发至干，必要时，加少许水，重复蒸干1次2次。加人3mL5mL柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)复溶，使试样溶液中氨基酸浓度达到50nmol/mL250nmol/mL,摇匀，过滤或离心，上清液待上机测定。2GB/T18246-20193.5.2测定将氨基酸标准工作溶液(3.2.6)注入氨基酸自动分析仪，以不同pH和离子强度的柠檬酸钠缓冲溶液与茚三酮溶液(3.2.7)作为流动相和衍生剂，适当调整仪器操作程序及参数和洗脱用缓冲溶液试剂配比，应符合JJG1064氨基酸分析仪检定规程的要求，并保证苏氨酸-丝氨酸、甘氨酸-丙氨酸以及亮氨酸异亮氨酸分离度分别不得小于85%、90%和80%，其标准溶液色谱图参见附录B的图B.1、图B.2。注入制备好的试样溶液和相应的氨基酸标准工作溶液进行测定，每5个样品（即10个单样）为一组，组间插入氨基酸标准工作溶液(32.6)进行校准。以保留时间定性，单点外标法定量。试样中氨基酸的峰面积应在标准工作溶液相应峰面积的30%200%，否则应用柠檬酸钠缓冲溶液(3.2.4)稀释后重测。3.6试验数据处理试样中氨基酸含量以其质量分数w(%)计，未脱脂试样按式(1)计算，脱脂试样按式(2)计算：u=”XA:XVXcXMXVx10(1)AtXmV:109w-nXA.XVXcXMXVx100 x(1-F)(2）AtmV,105式中：试样水解溶液稀释倍数；A,试样溶液中对应氨基酸的峰面积；V一试样水解溶液体积，单位为毫升(mL)c标准工作溶液中对应氨基酸的浓度，单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL):M一氨基酸的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol),各氨基酸摩尔质量见表A.1:V一氨基酸标准溶液进样体积，单位为微升(L):A一氨基酸标准溶液中对应氨基酸的峰面积m试样质量，单位为毫克(mg);试样溶液进样体积，单位为微升(L):F粗脂肪含量，%。以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果，保留两位小数。3.7精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值，当含量不大于0.5%时，不超过这两个测定值算术平均值的5%；含量大于0.5%时，不超过4%。4氧化酸水解法4.1含硫氨基酸的测定按GB/T15399的规定执行。4.2其他氨基酸的测定4.2.1原理以偏重亚硫酸钠为氧化终止剂时，可测定除酪氨酸、色氨酸以外的其他蛋白水解氨基酸：以氢漠酸3