GBT 16631-2008 高效液相色谱法通则.pdf

I(s 71 040 4o;71 o 40 50C 0 4中 华 人民 共 和 国 国 家 标 准GB/T 16631-2008代 替G B/T 1 6 6 3 1 1 9 9 6亠一冖冖效液相色谱法通则f o r h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h yGeneral rules2008-06-18发布2009-02-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会卩瑟|“,=初.故蛳发布CB/T16631-2008次目o 水、试剂和溶剂前 言15161 718 专项标准中涉及 的项 凵1 范囿2 规范性引用文件3 术语和定义t 高效液桕色谱法概述6 取样及预处理 的操作 仪 器g d 置8 洗脱剂l。仪器安装的环境耍求和安含11 测景和 试料的制备12 分析步骤13 定性分析11 定量分忻分 了章分布的测量q f 备 型液相色谱法数捃质景的保证T i i.b9 色谱t和+J填料568l o11121311l 18I9192123GB/T 1663卜-2008曰本标准修改采丿 日本丁业标准 J1s KO12102高效液相色谱法通则 (英 文版)。本标准根据 JIs K。121-2002重新起草,在附录中列 出了本标 准章条编号 与 JIs K012仁-2002章条编号的对照一览表.考虑到我 国国情,本标准与 HS K012102的t 要 差异如下:引 了我国国家标准GB/T90。8-2007(本标准第2蕈);删除了GB/T9008-2007巾已有的术语和定义(本 标准第3章);对试剂和溶剂规格分别进行 r 规 定(本 标准的52和53)。本标准代替GB/T16631 1996柱液相色谱分析法通则,本标准 与GB/T16631996相比主要变化如下:删除了1996年版标准的资料性附录附录、附录B、附录C、附录D、附录E、附录F、附录K、附隶M、附录N、附录P;增加 r 第3章“术语和定 义”、第5章“水、试剂和溶剂”、第6章“取样及预处理 的操作”、第16章“制锊型液相色谱 第17亭“数据质量的保证”和第18单“专项标准屮涉及的项 日”;修改 r 标 准名称(见 1996年版和本版标准的封面);修改了标淮范围(见 1996年版和本版标准的第1章);修改了高效液相色谱法概述(1996年版第3章;本版第1章);修改了亻 f 关 仪器配置的规定(1996年版第改串;本版第7章);修改丫有关洗脱剂的规定(1996年版第5章;本版第8章);修改了布关色谱柱和柱填料的规定(1996年版第6荸、笫9章;本 版第9章);修改 r 仪 器安装的环境要求和安全要求(1996年版附录G、附录H;本版第1章);修改 r 有 关测量/制 备前的准备丁作的规定(1996年版第7章;本 版第11章);修改 r 有 关操作过程的规定(1996年版第8章、笫10章、附录 J;本 版第12章);修改了亻 f 关 定性分析的规定(1996年版第11章;本版第13章);修改 r 有 关定量分析的规定(1996年版第12章、附录I;本版第11章);一修改 了亻 f 关 分 了量分布的测量的规定(1996年版第13章;本版第15章).本标准的附隶为资料性附录.本标准 由中国孑 f 油 和化学I业协会提 出.本标准由全国化学标准化技术委员会(S C/TC63)归II。本标准山中国石油化工股份有限公司北京燕 山分公司、中化化工标准化研究所负责起草。本标准主要起萍人:黄铃、徐泽峰、杨建海、魏静。本标准于1996年12月首次发布。亠刖CB/T16631-2008高效液相色谱法通则1 范围本标准规定 了使丹 J高效液相色谱法进行的定性定量分析和提纯精制的通用规则.本标准适川于使用高效液相色谱法对无机、布机化合物的定性定量分析及提纯精制,以及对高分子化合物的分子量的测定的一般要求.2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用 i 成 为本ITx 准的条款。儿是注 日期的引用文件、其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件 的最新版本.儿 是不注 日期的引用文件,其 最新版本适川于本标准。G吖 T9008 液相色谱法术语 柱色谱法和平面色谱法3 术语和定义(;l;/T9008确立的以及下列术语和定义适用于本标准。3 1高 效 液 相 色 谱 仪 h i g h p e r f o r m a n c e q u 记c h r o m a t o g a p h进行高效液相色谱分析的仪器。3 2分析物 analyte样;、宀 或样品溶液中存在的待分析的 H标 组分,3 3样品溶液 sampI c solution枰品溶解在其屮的溶液或提取 于分析的溶液.试样溶液 tcst sample soI uon用 于测试 的样 砧溶液本 身或预处理过 的样 品溶液泵 p 刂m p驱动流动相(洗 脱剂)的 设 备。自动进样器 automatic阳mple iI lJ ccttlr,auto sampkr白动将试样溶液接连地注射进到液相色谱仪的住子中的设备,柱箱 column c】,mpartmcn1色谱柱置于其 中的容器。色谱柱管 chroma1 ographicubc柱填料被填充在其中的圆形柱含,其 两端装配有过滤器等部件。353 63437JCB/r 16631-20083 9对称因子”mmet”factor辰征色谱峰的对称程度的因了.由 下列 方程得到:S=W 1 i,礻/2 F式中,S一对称 因子;W“.,片一 从峰基线测得的l/20峰高处 的峰宽度;从峰 顶点 向记录纸 的水 平轴划垂 直线,与 W00峰 宽线 桕交,峰 的前侧 的距 离定 义为;WO。,和 唯位相 同.3 10柱前衍生化 p r e c o Iu m n d e r i Va t i z a 1i o n,p r c c o l u m n l a b e Ii n g样品组分在进到色谐柱之前,与衍生试剂反应进行衍生化的过程。3 11柱后衍生化 p t o o l u m n d c o 哂t L a t i o n,p o s t C o l 1 I I I I】I I a b d i 吒样滔 宀 纽分在色谱柱分离之后,加衍生试剂到洗出液中进行衍生化的过程。3 12标准溶液 r e f e r e c e s t l l u t l o n共特征值如浓度或分 r 豆/L已 知的并确定足以用作液相色谱分析的标样的溶液。3 1 3分离模式 separation modeL耍 曲液相 色讠 氵 鲁 分肖机,m.进彳 i 分 类的操 仵模式。3 1 4稀 释 标 准 溶 液 d u t e d r c r e r e n c e s o i t|,1 t被稀f f t 成一定浓度的标准溶液。3 15混合标准溶液 mixcd rerO rence soI ution通过混合一种以 卜 标准溶液或稀释标准溶液制备的含规定浓度样品组分的溶液。3 16内标物 I I lternal s】andard内标法屮用作标样的物质,3 1 7分子量分布 m o l c c l l l a r w t i g h t d t r i b u t i o n与分子量有多分散性的化合物有关。表示了各种分子作为分 子量 函数的量.3 18卜 刍殳 f r a c 1i o n a t i o n通过色谱柱分离和洗脱取得分析物的操作。3 1 9流分 fraction通过分级操 仵分离得到的溶液.2CB/T1663120083 20方法确认 m e t h o d v a I 记a t I O n汪叨使用 高效液相色谱的分析方法适合分析 日的的各种测试.4 高效液相色谱法概述41 液相色谱法(IC)足种具有下述特征的物理和化学分离分析方法.它使用液体作为流动相,每种分析物在色谱柱的固定相和流动相问的相互作用存在差别,这 种差别被利用来分离混合物。流动相被加压传送 以取得短时问内的高效分离的液相色谱分析方法被称为高效液相色谱法(H PLC)。用于高效液相色谱法的设各被称为高效液+H色 谱仪42 I可应用于测定非挥发性或 耆热不稳定性 化合物,这些化 合物难 于用气相 色谱 法测定。囚为LC的扩散速度 比气相色谱法慢,所 以其分离能力 比气相色谱法差。虽然LC的分离能力没有气相色谱法高,但 是它炅有优 良的定量能力和容易得到分离的化合物的流分 的特点。LC不仅可应用 于一般 有机化合物,而 L也 可应丿 丁离子化合物、大然产物、聚合物以及其他广泛领域。43 通过综合分析高效液相色谱法所使用的冂定相和流动相町以认识其各种分离机理。表l 列出了高效液桕色谱法的分类及其分离机理的特点、典型柱填料及其用途.表1 III LC:分类和分离机理特点、典型柱填料及其用途44 HPI C的基本配置如图1所示.H PLC由下列部件纽成:流 动相提供单/L(液 体泵)、进样器、色谱柱和柱箱、检测器、数据处理机和记隶仪.流 动相的流速 山泵设定,定体积的流动相被传送到进样器,冉到色谱柱.泵 输送流动相 的流速范围通 常在001m L/m i n 10m L/m i n.常用往 复式柱塞泵(见图2).当使Fl l 梯 度洗脱法时,使用l 4个单元泵或耆一个梯庋器。离d 1理4丰 点典型柱填料月 J 途分 配色 谱(包 拈 反拊 l 分 配色讠 篝、正相 分师 J色 谱 以及 灰桕 离 r 对 色l n )分离是基 田定相和流动相闸分配平衙.各种柱填料 和 符种济 i动杆 l 的结 含应川广泛化 学 键 含 型 硅 胺(o r)s,NH耸)、多孔聚舍物等 范围从低 分子量 到高分j 量物质的分离。同系物的分离吸附包 店 分离 f L鏖 f 浴质在无机氧 化 物 罔定+l 上的 吸 附平衡。非极性有机溶剂用作流动朽 l砖胶、氧 化铝、工氧化钛、碳等 极性化 合物 和异 构体 的分离尺寸排 阻色谱(分 子筛分色谱、凝 胶 过 滤 色 诮、凝 胶渗透色谱)分离是基 寸聚合物填料窄孔 的分子筛分.操作条件温和 亲水聚合物填料 和合成 的 聚 含 物 填 料 有 不 同应用葡 聚 糖 凝 胶,琼 脂 糖 凝胶,聚 苯 乙烯 凝 胺,聚 甲基内烯酸酯凝胶等 蛋白、酶 等 的分 离纯化及 脱 盐(亲 水 聚合 物填料)。合成 聚合物 的分子量分 级(合 成 聚 舍 物 填料)离 子交 换 色谱包括 离子排斥色谱 和离子色谱)分离是基十 离子交换剂 和l 离子 溶 质 闸 的 静 电相互作用 应川广泛离子交换树脂 离子型 物质 的分 离分析,脱 盐,盐 交换亲合色谱 分鹞是雄 于衍 生 自生物组织 的分子识别能力。选择件极 高酶、肽、糖等组合 生理活性 物质 的浓缩、分 离和稀制CB/T 166312008数龆处犟机IPLC的基本舀二(示 t 囡)-进洋疹,色谙拄图2 住虫式柱塞泵的基本配二(示 忠图)45 通常用微母注射器量取一定体积的样品溶液,注人迸样 阀,扳 动 阀钮将样品溶液注人色谱柱.有时使用 自动进样器按序列 自动进多个样品。46 HPIC使川的柱填料其有相对均匀的颗粒尺寸,拉径一般在1u m 20m 之l l l l,填料被装填在 内径l m m 12m m 的不锈钢或塑料的色 谱柱管 屮,住 长一般几 十陲米或者更短.填料的粒径和柱 子的尺寸根据其用途而有所不同.47 分析物被色谱柱分离,然后基于共物理、光学、r 乜、化学及其他特性被检测器检测,H PI的典型检测器足紫外可l t 光检测器。通常这种检洲器的流迪池体积在饣 l L 20u I之问,它 测量被分离后 的分析物在一定波 下的吸光度(吸 收强度)。其他检测器包括示差折光指数检测器、荧光检测器、电化学检测器、电导检测器、质谱仪等。HPLC使用 的典型检测器的特点列于表2.当需要选择性