GBT 17335-1998 食品中栀子黄的测定.pdf

GB/T 173351998 前 言 前 言 栀子黄作为食品着色剂已经列入 GB 27601996 食品添加剂使用卫生标准，最大使用量 0.3 g/kg。目前日本用气相色谱方法测定，我们用高压液相色谱法测定。本方法快速、准确、精密度好。栀子黄作为食品着色剂已经列入 GB 27601996 食品添加剂使用卫生标准，最大使用量 0.3 g/kg。目前日本用气相色谱方法测定，我们用高压液相色谱法测定。本方法快速、准确、精密度好。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草；卫生部食品卫生监督检验所参加起草。本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草；卫生部食品卫生监督检验所参加起草。本标准主要起草人：李严巍、王梅、杨祖英。本标准主要起草人：李严巍、王梅、杨祖英。本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。中华人民共和国卫生部 19980420 批准 19990101 实施 GB/T 173351998 中华人民共和国国家标准 中华人民共和国国家标准 食品中栀子黄的测定 食品中栀子黄的测定 Determination of crocin in foods Determination of crocin in foods GB/T 173351998 GB/T 173351998 1 范围 1 范围 本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。本标准适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。第一法 高效液相色谱法 第一法 高效液相色谱法 2 原理 2 原理 样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。3 试剂 3 试剂 试剂均为分析纯，水为蒸馏水。试剂均为分析纯，水为蒸馏水。31 甲醇。31 甲醇。32 石油醚：6090。32 石油醚：6090。33 乙酸乙酯。33 乙酸乙酯。34 三氯甲烷。34 三氯甲烷。35 姜黄色素。35 姜黄色素。36 栀子甙。36 栀子甙。37 栀子甙标准溶液：称取 2.75 mg 栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至 100 mL 混匀。即得 27.5g/mL 栀子甙。37 栀子甙标准溶液：称取 2.75 mg 栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至 100 mL 混匀。即得 27.5g/mL 栀子甙。38 栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液 0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL于 10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至 10 mL，即得 0，5.5，11.0，16.5，22.0g/mL 的栀子甙标准系列溶液。38 栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液 0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL于 10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至 10 mL，即得 0，5.5，11.0，16.5，22.0g/mL 的栀子甙标准系列溶液。4 仪器 4 仪器 41 小型粉碎机。41 小型粉碎机。42 恒温水浴。42 恒温水浴。43 高效液相色谱系统：Water43 高效液相色谱系统：Waters M501 泵，U6K 进样器，岛津 RF-535。s M501 泵，U6K 进样器，岛津 RF-535。荧光检测器，Blue chip/PC 计算机和 Baseline 810 色谱控制程序。荧光检测器，Blue chip/PC 计算机和 Baseline 810 色谱控制程序。5 分析步骤 5 分析步骤 51 样品处理 51 样品处理 511 饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜 0.4m 过滤，滤液备作 HPLC 分析用。511 饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜 0.4m 过滤，滤液备作 HPLC 分析用。512 酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作 HPLC 分析用。512 酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作 HPLC 分析用。513 糕点：称取 10 g 样品放入 100 mL 的圆底烧瓶中，用 50 mL 石油醚加热回流 30 min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣 5 次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取 35 次，每次 30 mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。513 糕点：称取 10 g 样品放入 100 mL 的圆底烧瓶中，用 50 mL 石油醚加热回流 30 min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣 5 次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取 35 次，每次 30 mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。52 测定 52 测定 521 HPLC 参考条件 521 HPLC 参考条件 中华人民共和国卫生部 19980420 批准 19990101 实施 中华人民共和国卫生部 19980420 批准 19990101 实施 GB/T 173351998 色谱柱：粒度 5 m ODS C色谱柱：粒度 5 m ODS C18150 mm4.6mm 流动相：甲醇水（3565）流速：0.8 mL/min 波长：240 mm 522 标准曲线 在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液 0，2，4，6，8L，进行 HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。523 样品测定 在实验条件下，注入 5L“5.1”项下的样品处理液，进行 HPLC 分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。6 结果 61 计算 按式（1）计算。X=18150 mm4.6mm 流动相：甲醇水（3565）流速：0.8 mL/min 波长：240 mm 522 标准曲线 在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液 0，2，4，6，8L，进行 HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。523 样品测定 在实验条件下，注入 5L“5.1”项下的样品处理液，进行 HPLC 分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。6 结果 61 计算 按式（1）计算。X=1000mVA（1）（1）式中：X样品中栀子黄色素的含量，g/kg；式中：X样品中栀子黄色素的含量，g/kg；A进样液中栀子甙的含量，g；A进样液中栀子甙的含量，g；V样品制备液体积，mL；V样品制备液体积，mL；m样品质量，g。m样品质量，g。62 本标准的检测限、回收率、精密度。62 本标准的检测限、回收率、精密度。本方法栀子甙的检测限为 3.2g/mL，栀子黄色素浓度在 0.20.3g/kg 范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为 94.1%，92%，91.3%。相对标准差（R.S.D）%：2.69,4.70,3.20。本方法栀子甙的检测限为 3.2g/mL，栀子黄色素浓度在 0.20.3g/kg 范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为 94.1%，92%，91.3%。相对标准差（R.S.D）%：2.69,4.70,3.20。第二法 薄层色谱法 第二法 薄层色谱法 1 原理 1 原理 小样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓 小样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓 缩点样展开后，在 UV254nm 灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。缩点样展开后，在 UV254nm 灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。2 试剂 2 试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。21 甲醇。21 甲醇。22 乙醇。22 乙醇。23 乙酸乙酯。23 乙酸乙酯。24 丙酮。24 丙酮。25 甲酸。25 甲酸。26 三氯甲烷。26 三氯甲烷。27 硅胶 GF254：薄层色谱用。27 硅胶 GF254：薄层色谱用。28 展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水（5：5：1：1）。28 展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水（5：5：1：1）。29 展开剂：三氯甲烷：甲醇（6：3）。29 展开剂：三氯甲烷：甲醇（6：3）。3 仪器 3 仪器 中华人民共和国卫生部 19980420 批准 19990101 实施 GB/T 173351998 31 全玻璃浓缩器。31 全玻璃浓缩器。32 薄层板涂布器。32 薄层板涂布器。33 玻璃板，4cm20cm，20cm20cm。33 玻璃板，4cm20cm，20cm20cm。34 层析缸。34 层析缸。35 UV254nm 荧光灯。35 UV254nm 荧光灯。36 微量注射器。36 微量注射器。4 操作方法 4 操作方法 41 样品处理：将酒、饮料、蛋糕、样品处理后，进行 TLC 检识。见 5.2.2 展开结果。41 样品处理：将酒、饮料、蛋糕、样品处理后，进行 TLC 检识。见 5.2.2 展开结果。411 酒：取样品 100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取 35 次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩 20mL 为止，此液留作薄层分析用。411 酒：取样品 100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取 35 次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩 20mL 为止，此液留作薄层分析用。412 饮料：取样品 100mL，用乙酸乙酯萃取，每次 50mL，萃取 35 次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩 20mL，此液留作薄层分析用。412 饮料：取样品 100mL，用乙酸乙酯萃取，每次 50mL，萃取 35 次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩 20mL，此液留作薄层分析用。413 蛋糕：称取 10.0g 已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入 50mL 石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约 5mL，此液留作薄层层析用。413 蛋糕：称取 10.0g 已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入 50mL 石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约 5mL，此液留作薄层层析用。42 测定 42 测定 421 点样：取市售硅胶 GF254 荧光板，离板底边 2cm 处点样品提取液 0.5 421 点样：取市售硅胶 GF254 荧光板，离板底边 2cm 处点样品提取液 0.5 L，板的右边点 2L 栀子黄色素标准溶液.L，板的右边点 2L 栀子黄色素标准溶液.4.2.2 展开:将 4.2.1 项已点好样和标准板,用 2.8,2.9 展开剂展开,待栀子黄色素明显分开后取出,晾干,与标准斑点比较,栀子黄 Rf 值为 0.64 和 0.50。而姜黄色素为 0.11 和 0.15。样品与标品的斑点的 Rf 值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。4.2.2 展开:将 4.2.1 项已点好样和标准板,用 2.8,2.9 展开剂展开,待栀子黄色素明显分开后取出,晾干,与标准斑点比较,栀子黄 Rf 值为 0.64 和 0.50。而姜黄色素为 0.11 和 0.15。样品与标品的斑点的 Rf 值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。中华人民共和国卫生部 19980420 批准 19990101 实施 中华人民共和国卫生部 1