中华人民共和国国家标准蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定方法GB/T13110-91Methodfordeterminationoftetracyclinesresidueinhoney━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了用微生物管碟法测定蜂蜜中四环素族抗生素残留量的方法。本标准适用于天然或加工蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定。2原理样品中四环素族抗生素经Mcllvaine缓冲液提取后,用SEP-PAKC18柱纯化。四环素族三种抗生素四环素、土霉素及金霉素利用薄层层析生物检测法进行分离和定性；以蜡样芽胞杆菌为试验菌株,用微生物管碟法进行定量检测。3试剂所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.1Mcllvaine缓冲液(pH4)：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)27.6g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2g，用水溶解后稀释并定容至1000mL。3.20.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)：称取磷酸氢二钾13.6g,用水溶解后稀释并定容至1000mL,115℃灭菌30min，置4℃冰箱中保存。3.35%乙二胺四乙酸二钠盐水溶液。3.4WatersSEP-PAKC18柱(或国产PT-C18柱)：用时先经10mL甲醇滤过活化,再用10mL蒸馏水置换，然后用10mL5%乙二胺四乙酸二钠盐流过。3.5标准抗生素：四环素、土霉素，金霉素标准品由卫生部药品生物制品检定所提供。3.6抗生素标准原液和稀释液3.6.1抗生素标准原液配制：精确称取四环素，土霉素、金霉素标准品适量(按效价进行换算)，用0.01mol/L盐酸溶解并定容至1000μg/mL，置4℃冰箱中(可使用7天)。3.6.2抗生素标准稀释液配制：临用前取上述原液按1:0.8剂距用0.1mol/L磷酸盐缓冲液逐步稀释配制成标准稀释液。制备四环素、土霉素标准曲线的标准浓度为0.16,0.21,0.260.32,0.40,0.50μg/mL,参考浓度为0.25μg/mL；制备金霉素标准曲线的标准浓度为0.0330.041,0.051,0.064,0.08,0.10μg/mL,参考浓度为0.05μg/mL。定性试验用标准液浓度四环素，土霉素为2μg/mL，金霉素为1μg/mL。3.7展开剂：正丁醇-醋酸-水(4：1：5)。4仪器4.1隔水式恒温箱。4.2冰箱:0～4℃。4.3恒温水浴。4.4高压灭菌器。4.5旋转式减压蒸馏器。4.6离心机：2000r/min。4.7天平：感量0.1mg。4.8层析缸：内长20cm、宽15cm、高30cm。4.9长方形培养皿：1.5cm×8cm×23cm。4.10层析纸：7cm×22cm，中速滤纸。4.11微量注射器：10μL、50μL。4.12电吹风机。4.13游标卡尺。4.14吸管：容量为1mL和10mL，标有0.1mL单位刻度。4.15注射器：容量为20mL。4.16平皿：内径为90mm...
