SNT 4078-2020 蜂房小甲虫检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 40782020代替 SN/T 40782014蜂房小甲虫检疫技术规范Quarantine protocol for the small hive beetle2020-12-30 发布2021-07-01 实施ICS 11.220CCS B 41中华人民共和国海关总署发 布SN/T 40782020I前 言本文件按照 GB/T 1.12020 给出的规则起草。本文件代替 SN/T 40782014蜂房小甲虫检疫技术规范。本文件与 SN/T 40782014 相比，主要技术变化是：增加了蜂产品中蜂房小甲虫的检疫方法；补充了蜂房小甲虫成虫典型形态特征描述；修改补充了附录 A 中蜂房小甲虫的成虫形态特征图。本文件参考世界动物卫生组织（OIE）制定的陆生动物诊断试验和疫苗标准手册（2017 版）中第 2.2.5 章关于蜂房小甲虫检疫鉴定方法，一致性程度为本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国武汉海关。本文件主要起草人：冯汉利、郑剑、郭明星、陈建军、颜小平。本文件所代替文件的历次版本发布情况为：SN/T 40782014。1SN/T 40782020蜂房小甲虫检疫技术规范1 范围本文件规定了蜂房小甲虫的概述，现场检疫、实验室鉴定及结果判定方法。本文件适用于蜂房小甲虫的检疫及蜂产品中蜂房小甲虫的鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18088 出入境动物检疫采样3 术语、定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 概述蜂房小甲虫（Small hive beetle，简称 SHB，拉丁名 Aethina tumida Murray）是寄生在蜂箱的一种食腐甲虫类动物，属于鞘翅目（Coleoptera），露尾甲科（Nitidulidae）。蜂房小甲虫的成虫和幼虫取食蜂巢中的蜂蜜、花粉。甲虫摄食过的蜂蜜呈水态并发酵，成年甲虫则喜食蜜蜂卵和幼虫，严重危害蜂群繁殖力，破坏梳子和巢脾，致使蜂群垮掉、飞逃，甚至死亡，影响蜂蜜品质，给养蜂业带来巨大损失。蜂房小甲虫最早出现在南部非洲一些国家，其对当地蜂群危害程度不大，主要威胁弱群或较弱的蜂群，非洲蜂群强能阻止小甲虫在群内繁殖。欧洲蜜蜂对甲虫的清除不如非洲蜜蜂强，蜂房小甲虫对欧洲蜜蜂危害程度远远超过非洲蜂群。蜂房小甲虫病流行发生特征、形态描述具体资料参见附录 A。5 现场检疫5.1 采样工具及防护用品准备防护服、无菌手套、一次性口罩、帽子等防护用品，放大镜、灭菌广口瓶、灭菌镊子。5.2 抽检比例种用蜂：不低于总件数 20%50%；生产蜂：100 群以下不低于 15%20%，101200 群不低于1015%，201300群不低于10%，300群以上不低于5%10%。抽检比例按GB/T 18088的规定。5.3 检查方法5.3.1 现场检疫样品采集时注意好个人防护，穿戴好防护服等防护用品。蜂群检疫前先注意观察蜂2SN/T 40782020箱周围有无不正常的病死蜂，随后按抽检比例，随机确定检查蜂群（或逐群检查）进行认真检查。5.3.2 将蜂箱封盖打开，观察蜂箱的角落、巢框上梁和箱壁的中间、打开的巢房或底板的碎屑下面，观察有无甲虫或其幼虫。然后抓住巢框角上方抖动巢脾，轻轻抖掉一半或四分之三的蜜蜂后将巢框取出，同时观察蜂箱底部有无甲虫或幼虫，在距离蜂箱不远的平地上铺上纸或者木板，使巢脾水平置于其上方，将巢框竖立起来，轻敲巢脾，仔细观察抖落在其上面的残留物。如发现蜂房小甲虫或其他类似甲虫，放进灭菌广口瓶，加贴标识送实验室检疫鉴定。6 实验室鉴定6.1 试剂和材料6.1.1 放大镜（510 倍）。6.1.2 解剖针。6.1.3 小号驼毛笔。6.1.4 载玻片、盖玻片。6.1.5 筛网（孔径为 0.250 mm）。6.1.6 30%甘油溶液。6.2 仪器和设备6.2.1 显微镜。6.2.2 体视显微镜。6.3 试验步骤6.3.1 样品的直接检验对于透明度高的蜂蜜、蜂王浆等样品，首先应检查整个样品内部有无悬浮疑似小甲虫的黑色或其他颜色的点状物颗粒，直接用吸管取出检查，检查方法见 6.4。6.3.2 样品制备未结晶的样品，将其搅拌均匀。有结晶析出导致透明度差的样品，应在密闭情况下，置于不超过 60的水浴锅中水浴，充分振荡待样品全部融化、混匀，冷却至室温待检。称取蜂蜜样品100 g，加入 40的 100 mL 蒸馏水，使得蜂蜜熔解和稀释。6.3.3 样品的过滤样品慢慢倾倒通过孔径为 0.250 mm 的筛网，截留成分用蒸馏水清洗两遍，使得截留的成分在滤网上分布均匀，无叠加。6.4 检查方法截留物先用肉眼观察，有无疑似蜂房小甲虫的黑色或其他颜色的点状物颗粒，再用 510 倍放大镜或体视显微镜检视。有小甲虫者，用解剖针或小号驼毛笔挑取小甲虫放在滴有一滴甘油溶液的载玻片上，置显微镜下观察。6.5 形态鉴定6.5.1 成虫形态鉴定蜂房小甲虫成虫通常为黑色，有时为浅褐色，其体色随日龄增长不断加深。形体为椭圆形，3SN/T 40782020一般体长 5 mm，宽 3 mm，雌性甲虫（5.7 mm0.02 mm）大于雄性甲虫（5.5 mm0.01 mm）。较小的个体可穿过蜂箱的纱网或底板纱窗的铁丝网。放大镜观察蜂房小甲虫，分为头部、胸部和腹部三部分。其触角缩到头部下面，伸展开后可看到末端有很多小节，为致密的棒状触角（具体图片参见图 A.1），触角柄节及端部 3 节膨大。蜂房小甲虫有 3 对足，基节较粗，胫节端部膨大，跗节有绒毛，其末端尖而锋利。蜂房小甲虫其背板坚硬，前胸背板宽大、长，约占体长 1/3，鞘翅宽大，未覆盖整个腹部（与其他甲虫鉴别诊断主要特征），表面有纤毛和刻点，腹节 4 节。6.5.2 幼虫形态鉴定蜂房小甲虫幼虫通常体长 1.2 cm，宽 1.6 mm。背部有许多小突刺（参见图 A.3）；蜂房小甲虫幼虫有较明显的大的头壳和 3 对足，虫体一般为乳白色，但有时在其产生的粘液中爬行时呈浅棕色；蜂房小甲虫幼虫可产生粘液，这些粘液能驱避蜜蜂，不驱避苍蝇，粘液是蜂房小甲虫出现较明显的标志物。7 结果判定7.1 以蜂房小甲虫成虫特征作为鉴定主要依据。7.2 结合现场检疫及实验室形态特征鉴定，符合 6.5.1 形态特征描述，则判定检出蜂房小甲虫。发现蜂房小甲虫幼虫可初步判为蜂房小甲虫，不能确诊，需在土壤 3 d 经蛹化为成虫后才能确诊。4SN/T 40782020附 录 A（资料性）蜂房小甲虫流行发生特征及蜂房小甲虫形态描述A.1 蜂房小甲虫病流行发生特点蜂房小甲虫早就在非洲很多国家存在。这些国家有南非、博茨瓦纳、埃塞俄比亚、肯尼亚、纳米比亚、安哥拉、中非、塞内加尔、加纳、刚果（布）、刚果（金）、尼日利亚、津巴布韦、利比亚、坦桑尼亚、厄立特里亚和几内亚比绍。1867 年首次从非洲西海岸的旧卡拉巴尔（尼日利亚）采样，送到伦敦鉴定并有拉丁命名Aethina tumida Murray。1996 年 5 月首次在美国佛罗里达州发现，传入美国的蜂房小甲虫源于撒哈拉沙漠以南的非洲大陆，蜂房小甲虫已成为美国养蜂业的头号杀手。2002 年 8 月加拿大马尼托巴省首次发现，并分别于 2006、2008 和 2012 年在不同地区陆续发现蜂房小甲虫。2002 年 10 月在澳大利亚悉尼西北部的里士满也发现蜂房小甲虫。葡萄牙2004年在进口蜂王中发现蜂房小甲虫的幼虫和卵。2012年8月古巴首次报道发现蜂房小甲虫。2014年9月18日，意大利卫生部向OIE紧急报告，9月5日至9月17日，卡拉布里亚区（Calabria）发生 2 起蜂房小甲虫病。涉及的易感动物有 47 箱蜜蜂，其中 7 箱发病，销毁 3 箱。蜂房小甲虫可通过飞行以及被侵入的蜂群转运或污染的蜂产品的贸易四处快速传播。A.2 蜂房小甲虫生活史蜂房小甲虫经卵传播，其生活史为：卵幼虫蛹成虫。污染了蜂房小甲虫的蜂巢脾、蜂卵、蜂蜜、花粉是其传染源。蜂房小甲虫成虫的体色为浅褐色至黑色，月龄越大体色越黑，形体呈椭圆形，体长约为工蜂的 l/3，体宽为体长的 2/3。雌虫产的卵呈不规则团状，遍布蜂箱，一般产于空巢房及蜂箱的小裂缝中，经过 2 d3 d（至少 1 d，最多 6 d），白色幼虫孵出，幼虫以花粉和蜂蜜为食，它们爬到哪里，便破坏哪里的蜂卵和巢房，这一破坏期持续 l0 dl6 d，直到幼虫完全成熟。幼虫完全成熟后，便循着光线爬到蜂箱外的土壤中开始化蛹。蛹期通常为 4 周，可在 l5 d60 d 之间波动。刚羽化的成虫便开始寻找配偶和寄生的蜂箱雌虫，在羽化 1 周后便可完全性成熟，进行产卵。一只蜂房小甲虫从卵到成虫，约在 38 d8l d 之间。具体时间随周围环境温度、土壤湿度等因素的变化而变化。在合适的环境下，蜂房小甲虫每年能繁殖 5 代以上。A.3 蜂房小甲虫形态特征A.3.1 卵期蜂房小甲虫的卵（见图 A.2）呈豆形，珍珠白色，通常长 1.4 mm，宽 0.26 mm，卵与工蜂卵相似，但是比工蜂卵小，仅是工蜂卵的 2/3。卵呈一束一束的不规则状，1 只雌性蜂房小甲虫一生要产 1 000 个卵，平均每天 13 个左右。卵一般产在蜂箱内巢脾的缝隙间、蜂箱底部，或护脾工蜂不多的幼虫脾和粉蜜脾。卵一般 3 d6 d 孵化。A.3.2 幼虫蜂房小甲虫的幼虫（见图 A.3）呈乳白色。幼虫期 10 d16 d，在蜂巢 13.3 d，在土壤 3 d。大多数幼虫在 10 d14 d 成熟。成熟晚的个体较小，发育成的成虫也较小，它们大多数在进入土5SN/T 40782020壤蛹化前死亡。幼虫完全长大后有 1.2 cm 长，直径超过 0.15 cm，幼虫通常覆盖有黏滑的外壳，有 3 对足，背部有小脊。成熟幼虫在晚上 7 点至 10 点离开蜂巢进入土壤，9 点是迁移高峰。A.3.3 蛹离开蜂巢后，成熟的小甲虫幼虫进入土壤 3 d 后化蛹，蛹期 8 d。雌性甲虫的蛹期比雄性的短。蛹的前期是白色然后逐渐变成棕色，干燥土壤不利于化蛹，在潮湿土壤中小甲虫化蛹率在92 98。A.3.4 成虫蜂房小甲虫（见图 A.1）通常为黑色，有时为浅褐色，其体色随日龄增长不断加深。一般体长 5 mm，宽 3 mm，雌虫个体大于雄虫。打开蜂箱检测时，成虫通常为了躲避阳光，从蜂箱盖板或巢脾快速逃逸，隐藏在蜂箱角落处。较小的个体可穿过蜂笼运输箱的纱网或底板纱窗的铁丝网。蜂房小甲虫成虫因与其它露尾甲科的甲虫形态相似而易混淆，往往通过其寄居群体不同辅助鉴别。蜂房小甲虫的触角很有特点，经常缩到头部下面，如伸展开，可看到末端有很多小节，为棒状触角。刚孵化出的成虫很活跃，1 d2 d 就能飞行。图 A.1 蜂房小甲虫成虫a）背面观 注：图 a）由美国弗罗里达大学 Lyle Buss 拍摄，图 b）由 Josephine Ratikan 拍摄。b）腹面观图 A.2 蜂房小甲虫卵 注：图片由美国弗罗里达大学 Josephine Ratikan 拍摄。6SN/T 40782020a）背面观b）腹面观图 A.3 蜂房小甲虫幼虫 注：图片由美国弗罗里达大学 Josephine Ratikan 拍摄。SN/T 40782020中华人民共和国出入境检验检疫开本 8801230 1/16 印张 1 字数 28 千字2021 年 6 月第一版 2021 年 6 月第一次印刷印数 1500书号：155175150 定价 18.00 元蜂房小甲虫检疫技术规范行 业 标 准SN/T 40782020*北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023）编辑部：（010）65194242-7509中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷中国海关出版社有限公司出版发行网址