SNT 3731.5-2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第5部分：鸭成分检测 PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3731.5-2013食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第5部分：鸭成分检测PCR法Identification of poultry ingredient in food and feed-Part 5:Detection of duck ingredient-PCR method2013-11-06发布2014-06-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T3731.5-2013测引物进行PCR扩增，经电泳，在226bp大小处观察是否有扩增条带，必要时进行测序，来判断样品中是否存在鸭成分。6试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物（对）序列鸭成分扩增引物详见表1。表1试验用引物名称序列(5-3)目的基因鸭成分5端引物F:5-CTCATCTATCCTGCTAGCCGC-3鸭线粒体细胞色素C氧化酶基因鸭成分3端引物R:5-GCCTAGTTCGGGGGTTGGTA-36.2试剂6.2.1液：1%CTAB;0.05 mol/L Tris-HCl(pH8.0);0.7 mol/L NaCl;0.01 mol/L EDTA(pH8.0)。6.2.2DNA聚合。6.2.310PCR缓冲液。6.2.4硫酸镁。6.2.5dNTP混合液。6.2.675%乙醇。6.2.7三氯甲烷。6.2.8异丙醇。6.2.9液：Tris 54 g,酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA Tris-HCl(pH8.0)20 mL;加蒸馏水1000mL;使用时10倍稀释。6.2.10溴化乙锭（或等效染色剂）。6.2.11上样缓冲液。7仪器和设备7.1离心机（最大离心力大于12000g)。7.2 微量移液器(100 L1 000 L,20 L200 L,2 L20 L,0.5 L10 L)。7.3热循环仪。7.4恒温水浴锅。7.5天平：感量0.001g和0.1g。7.6涡旋振荡器。7.7pH计。7.8电泳仪。7.9凝胶成像仪。2