农业部2630号公告-2-2017 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂油菜73496及其衍生品种定性PCR方法.pdf

农业部2630号公告2一201773496-F:5-ACTTGTTCGTTGGAGTTGTC-3;73496-R:5-TCGTGTTCAGTCCAATGACC-3预期扩增片段大小为281bp(参见附录A)。5.14.2实时荧光PCR方法引物/探针73496-QF:5-TGCTTGCTGAGCTGGTCC-3;73496-QR:5-ATCATCAGTTCATACAAACCTCCA-3;73496-QP:5-ACTTACGGCACGTTTAGGAAGGC-3预期扩增片段大小为141bp(参见附录A)。注：73496-QP为73496转化体特异性序列的Taqman探针，其5端标记荧光报告基团（如FAM、HEX等），3端标记对应的淬灭基团（如TAMRA.BHQ1等）。5.15引物溶液：用TE缓冲液(5.6)或水分别将上述引物和探针稀释到10mol/L。5.16石蜡油。5.17DNA提取试剂盒。5.18定性PCR试剂盒。5.19PCR产物回收试剂盒。5.20实时荧光PCR试剂盒。6主要仪器和设备6.1分析天平：感量0.1g和0.1mg。6.2PCR扩增仪：升降温速度1.5/s,孔间温度差异1.0。6.3荧光定量PCR仪。6.4电泳槽、电泳仪等电泳装置。6.5凝胶成像系统或照相系统。7分析步骤7.1抽样按NY/T672和农业部2031号公告一19一2013的规定执行。7.2试样制备按NY/T672和农业部2031号公告一19一2013的规定执行。7.3试样预处理按农业部1485号公告一4一2010的规定执行。7.4DNA模板制备按农业部1485号公告一4一2010的规定执行。7.5PCR扩增7.5.1普通PCR扩增7.5.1.1试样PCR扩增7.5.1.1.1油菜内标准基因PCR扩增按农业部2031号公告一9一2013中7.5.1的规定执行。7.5.1.1.2转化体特异性序列PCR扩增7.5.1.1.2.1每个试样PCR扩增设置3个平行。7.5.1.1.2.2在PCR管中按表1依次加入反应试剂配制反应体系，混匀，再加25L石蜡油（有热盖3