SNT 3730.4-2013 食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第4部分：驴成分检测 实时荧光PCR法.pdf
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SNT
3730.4-2013
食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法
第4部分：驴成分检测
实时荧光PCR法
3730.4
2013
食
SN/T3730.4-2013探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在驴成分。6试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物（对）序列和探针驴成分扩增引物和探针详见表1。表1试验用物和探针名称序列(53)目的基因驴成分5端引物F:5-AATAGCTCTAGCCGTACGGCTAACT-3驴线粒体驴成分3端引物R:5-CAGGATAATGAATGTAATAAGGGCTG-3ATPase6基因驴成分探针P:5-FAM-TGCCGGACATCTTCTAATCCACOTT-ECLIPSE-36.2试剂6.2.1裂解液：1%CTAB:0.05mol/Tris-HCl(pH8.0):0.7mol/L NaCl0.01mol/L EDTA(pH8.0)。6.2.2DNA聚合酶。6.2.32荧光PCR缓冲液。6.2.4硫酸镁。6.2.5dNTP混合液。6.2.6ROX染料6.2.7三氯甲烷。6.2.8异丙醇。6.2.975%乙醇。6.2.10双蒸水。7仪器和设备7.1离心机（最大离心力大于12000g)。7.2微量移液器(100L1000L,20L200L,2L20uL,0.5L10L)。7.3实时荧光PCR仪。7.4恒温水浴锅。7.5天平：感量0.001g和0.1g。7.6涡旋振荡器。7.7pH计。8检验步骤8.1样品制备称取待检样品200g,研磨混匀待用。2
