中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5188—2020迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范QuarantineprotocolforedwardsiellasisICS65.150CCSB41中华人民共和国海关总署发布2020-12-30发布2021-07-01实施ISN/T5188—2020前言本文件按照GB/T1.1—2020的规定起草。本文件中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国重庆海关。本文件主要起草人：杨俊、聂福平、李应国、刘生峰、王昱、王国民、李贤良、张雷、肖进文、周庆。1SN/T5188—2020迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范1范围本文件规定了迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定、聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光PCR的检测技术要求。本文件适用于水生动物迟缓爱德华氏菌病检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语、定义和缩略语本文件没有需要界定的术语和定义。下列缩略语适用于本文件。E.tarda：迟缓爱德华氏菌。4迟缓爱德华氏菌病迟缓爱德华菌病，是由迟缓爱德华菌引起的水生动物疾病的统称。鱼类感染后主要出现肠道败血症和肝肾坏死病。迟缓爱德华氏菌病流行病学、临床症状、病理变化等资料参见附录A。5病原分离与鉴定5.1仪器设备显微镜：10×～100×。5.2培养基5.2.1血琼脂:见B.1。5.2.2营养琼脂：见B.2。5.2.3硫酸亚铁琼脂：见B.3。5.2.4半固体琼脂：见B.4。5.2.5丙二酸钠培养基：见B.5。5.2.6蛋白胨水：见B.6。5.2.7葡萄糖蛋白胨培养基：见B.7。5.2.8赖氨酸脱羧酶培养基：见B.8。5.2.9ONPG培养基：见B.9。5.2.10糖发酵管：见B.10。2SN/T5188—20205.2.11可使用商业化的培养基。5.3病料的采集和处理无菌采取适量患病动物肝、肾及病变组织，置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗，匀浆待用。如不能立即进行检验，需将采集或处理的样品置4℃～8℃条件下保存，且不超过24h。5.4分离培养取样品匀浆，划线接种血琼脂平板，28℃±1℃培养24h～48h。从中挑取灰白色、圆形、湿润、呈半透明状的单菌落在普通营养琼脂平板上纯化培养。5.5染色镜检将可疑菌进行革兰氏染色，于显微镜下观察。迟缓爱德华氏菌为革兰氏阴性短杆菌，无荚膜，无芽胞，大小约为（0.5μm～1μm）×（1μm～3μm）。5.6生化试验5.6.1氧化酶试验取白色洁净滤纸蘸取菌落，加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳...
