SNT 3576-2013 转基因成分检测 大豆PCR-DHPLC检测方法.pdf

SN/T3576-2013转基因成分检测大豆PCR-DHPLC检测方法1范围本标准规定了大豆中转基因成分的PCR-DHPLC检测方法。本标准适用于转基因大豆(roundup ready soybean,RRS)中的转基因成分的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适角于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.7转基因产品检测缅样和制样方法SN/T1193基因检验实验室技术要求3原理变性高效液相色谱技术(denaturing hig-performance liquid chromatography,DHPLC)是一种简单、快速、非凝胶的核酸分析方法，在50C条件分析样品，由碱基对的数量决定样品峰的洗脱顺序，当过柱的乙腈浓度提高，核酸片段会根据相对分子质量从小到大的顺序被洗脱出来。本标准采用多重PCR方法针对转基因大豆含有的转基因成分同时进行扩增，扩增产物用DHPC进行分析，通过DHPLC得到的洗脱峰与marker比较确定相对分子康量大小，判定是否带有外源基因成分及是否为转基因大豆。4设备、用具及试剂4.1设备及用具组织粉碎机、PCR仪、DHPLC仪、水浴锅、电子天平（精度：1/O0以上）、普通离心机、低温冷冻高速离心机、冰箱、低温冰箱、制冰机、恒温干燥箱、pH计、移液器(0.14L,0.5L,2L,10L,20L,100L,200L,1000L)、紫外可见分光光度计、纯水机、高压消毒锅、PCR管(0.2mL)、离心管(1.5mL,2.0mL)、Tip头(0.1L10uL,5L一200gL,100L500uL)。4.2试剂CTAB提取液、Tris饱和酚、三氯甲烷，异戊醇、异丙醇、70%乙醇、RNA酶(10mg/mL)、多重PCR反应液缓冲液(Multiplex PCR Mix)、Tag DNA聚合酶，DHPLC缓冲液A:TEAA(O.1mol/L,pH7.O)、乙腈(0.025%)，DHPLC缓冲液B:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙腈(25%)，DHPLC缓冲液D:乙腈(75%,pH7.0)、分子量标记(marker)。5抽样与制样按照GB/T19495.7进行。