SNT 3431-2012 香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法.pdf

SN/T3431-2012行下一步检测。7.2.4生理生化指标测定结合实验条件对分离菌株进行生理生化指标测定。应用微量发酵管对分离菌株进行生理生化指标的测定。若分离菌株能水解吐温60、吐温80、淀粉、蔗糖、葡萄糖、果糖和海藻糖，液化明胶，强烈水解卵磷脂，使石蕊牛乳产碱、胨化，则生理生化指标测定结果为阳性。应用微生物自动鉴定系统对分离菌株进行生理生化指标的测定。按照微生物鉴定系统规定的操作方法进行，若鉴定结果为Xanthomonas arboricola,则判定该分离菌株的微生物鉴定系统的鉴定结果为阳性。7.3致病性测定将在YPGA或GYCA培养基上培养48h后的菌株，配成110*CFU/mL的细菌悬浮液，采用针刺接种法，用消毒的接种针蘸上细菌悬浮液，针刺香蕉苗的第三片、第四片叶和嫩茎等，每一菌株接种5株，阴性对照用无菌水代替接种液。接种后的植株置放于人工气候箱，在2832温度下，先在100%相对湿度保温24h48h,然后在80%左右的相对湿度下，每天在7000lx10000lx下光照培养16h,黑暗下培养8h,接种7d后开始观察症状，每天观察一次，连续观察30d。植株上的叶片出现不规则小的褐色病斑，病斑有黄色坏死环纹，边缘坏死，叶片感病部分横切面出现褐变且挤压有细菌溢出的视为发病，表明从种苗上分离到的菌株具有致病性，而且需要从接种病斑上再次分离出来；不表现症状的接种植株视为不发病。8结果判定根据分离菌株在培养基上的形态特征，生理生化指标测定结果对可疑菌落进行鉴定，至少采用一种方法（生理生化指标测定和微生物鉴定系统）对可疑菌落进行鉴定，最后进行寄主的致病性测定以确诊。如果生理生化指标测定结果或微生物鉴定系统的鉴定结果为阳性，且致病性测定表现为典型症状，则判定为检出香蕉坏死条纹病菌；如果各种鉴定方法都为阴性，则判定为未检出香蕉坏死条纹病菌。9样品和菌种保存9.1样品保存样品拍照后均应制成干标本，经登记和签字后置于阴凉干燥、防虫防鼠处妥善保存3个月。对鉴定为香蕉坏死条纹病菌的样品至少应保存1年，以备复检、谈判和仲裁，样品保存期满后，需经灭菌处理。9.2菌种保存从样品中分离并鉴定为香蕉坏死条纹病菌的菌株应转接到试管斜面，经登记和签字后置于4冰箱中保存，定期转接；或病菌悬浮液加30%甘油置于超低温冰箱(-80)长期保存，或用真空干燥机制成病菌冻干粉置于超低温冰箱（一80）长期保存。3