SNT 4561-2016 转基因检测非标方法确认评价指南.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4561-2016转基因检测非标方法确认评价指南Guideline for validation of genetically-modified organism test methods2016-08-23发布2017-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布刮涂层查真伪SN/T 4561-2016前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：饶红、张锡全、郭铮蕾、傅溥博、李宏、梁新苗、马丹、徐姗、韩玥、林远辉。ISN/T4561-2016引言在本标准中技术性内容与欧盟委员会联合研究中心组织编写的指南性文件Definition of MinimumPerformance Requirements for Analytical Methods of GMO Testing European Network of GMO La-boratories中的内容完全一致。该指南性文件中规定了转基因检测方法涉及的性能指标的判定标准，这一文件是欧盟对转基因非标检测方法确认过程是否有效的评价依据。在欧盟范围内所有转基因非标检测方法的确认均使用这一文件进行评价。本标准采纳了该指南的技术性内容。在转基因检测领域，国内尚无指导性的行业或国家标准规范来统一转基因检测方法确认工作的尺度，保证不同实验室在统一的技术规范指导之下进行方法确认工作，因此编制本标准。SN/T4561-2016转基因检测非标方法确认评价指南1范围本标准规定了转基因生物检验方法确认中的术语和定义、技术方案、数据统计分析、方法的性能指标及结果报告等评价内容。本标准适用于拟制定或修订的各类方法中涉及转基因生物定性、定量检验方法的确认活动有效性的评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(ISO5725-2:1994IDT)GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求(ISO/IEC17025:2005IDT)3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1待确认方法alternative method拟制定或修订的用于检验给定目标转基因生物的分析方法。3.2基准方法reference method国际、国家或行业或组织认可并被广泛接受的方法。优先考虑国际标准化组织(ISO)、中国国家标准(GB)、国际分析家协会(AOAC)推荐的方法，其他国际认可的方法也可以作为基准方法。3.3方法确认validation of method使用批准生效的确认方案中所规定的统计学方法，比较分析使用待确认方法(3.1)和基准方法(3.2)获得的检测结果，证实待确认方法有足够的可信度。3.4实验室内确认validated in the laboratory在组织实验室或方法确认负责人的指导下，在方法制定或使用的实验室内对待确认方法和基准方法进行比较。3.5合作实验室间的研究inter-laboratory collaborative study几个实验室在有证明文件的情况下对一个或多个稳定的、均一的原料进行量化检测实验，并把结果汇编成单一的文件。合作实验的指导方针在ISO5725和ISO/AOAC/IUPAC协议草案中有详细的描述。1SN/T4561-20163.6方法确认负责人或组织实验室的负责人 study director or organizing laboratory responsibilities负责组织实验室内方法比较，提出基准方法，依照方法确认标准来确定提供试验数据；并制定和组织实施实验室间协同试验方案等确认工作的人员。3.7协作者collaborators在方法确认负责人或组织实验室的指导下进行实验分析，并按照要求对待确认方法进行各项确认试验并报告所有结果的人员。协作者可以是管理机构、工厂或研究院等不同实验室的有分子生物学试验经验的人员。3.8协作实验室collaborate laboratory协作者所属的实验室。协作实验室应通过GB/T27025(ISO/IEC17025:2005IDT)认可，实验室间协同试验所需的基准方法在实验室认可范围内。3.9适用性applicability用于鉴定基质、分析物或种类的方法的应用范围，根据其性能特征来判断它的浓度范围和研究/监控类型是合适的。也就是通常所说的方法的局限性。3.10实用性practicability操作的简便性，根据完成特定必要的性能标准从而符合指定的目的所需的样品量和费用。3.11DNA浓度DNAconcentration每个单位体积溶液中分析物的数量。3.12DNADNA degree of rupture基因组DNA(高分子量)断裂成DNA碎片的断裂度。3.13DNA度DNAextractionpurity降低可以观察到的或可测量到的PCR抑制物的作用。3.14特异性specifity方法只能检测特定的分析物。3.15动态范围dynamic range由合作实验证明了分析过程内的浓度间隔具有适当水平的精确度和正确度。3.16真实度truness大量实验结果的平均值和认可参考值的一致性。真实度的量度标准通常是以斜率表示的。3.17扩增效率amplification efficiencyDNA扩增呈指数上升的效率。PCR原理中，反应一个循环，PCR产物扩增一倍，反应N个循环，理论上应为原来的2。此时，理论的扩增效率是100%。实际上由于酶、dNTPs、引物、模板等因素，扩增效率达不到100%，100%的扩增效率换算得到的标准曲线斜率是一3.32。扩增效率可以用式(1)2