农业部781号公告-8-2006 蜂蜜中双甲脒残留量的测定 气相色谱－质谱法.pdf

农业部781号公告-一8一2006前言本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）。本标准主要起草人：赵静、薛晓锋、李熠、李桂芬、陈兰珍、周金慧、邱静。本标准附录是资料性附录。农业部781号公告一8一2006蜂蜜中双甲脒残留量的测定气相色谱一质谱法1范围本标准规定了蜂蜜中双甲眯残留量检测的制样和气质联用测定方法。本标准适用于蜂蜜中的双甲脒残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1一20001.4标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T1.120001.4一2001标准编写规则第四部分：化学分析方法的编写规则GB/T6682一1992分析实验室用水规则和试验方法农业部农牧发20031号兽药残留实验技术规范（试行）】3制样3.1试样的制备取适量无结晶的空白或供试样品，搅拌均匀。对于结晶的样品，在密闭的情况下，放置于不超过60的水浴中溶解，称样前冷却至室温，搅拌均匀。3.2试样的保存常温状态保存。4测定方法4.1方法提要或原理将试样用pH=11.0的氢氧化钠水溶液溶解，试料中残留的双甲脒（及代谢物2,4二甲基苯胺）用正己烷提取，离心后，取上层有机相，浓缩后用气质联用仪分析，外标法定量。4.2试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2.1双甲脒对照品含双甲脒(C19HN3)不得少于99.0%。4.2.22,4-二甲基苯胺对照品含2,4-二甲基苯胺(C8H11N)不得少于99.0%。4.2.3乙睛色谱纯。4.2.4正己烷色谱纯。4.2.5氢氧化钠分析纯。4.2.60.1molL氢氧化钠水溶液称取氢氧化钠4.0g,用水溶解，并稀释至1000mL,摇匀即得。4.2.7氢氧化钠水溶液(pH=11.0)取一定量的水在pH仪上用0.1molL氢氧化钠水溶液调节pH=11.0。4.2.8双甲脒标准储备溶液准确称取适量双甲脒标准品，用乙腈溶解并稀释成浓度为0.1mg/mL的贮备液，于48冰箱1农业部781号公告一8一2006中保存，可以使用3个月。4.2.92,4-二甲基苯胺标准储备溶液准确称取适量2,4-二甲基苯胺标准品，用乙腈溶解并稀释成浓度为0.1mgmL的贮备液，于4一8冰箱中保存，可以使用3个月。4.2.10双甲脒和2,4-二甲基苯胺混合标准工作溶液准确量取适量双甲脒和2,4-二甲基苯胺的标准储备液，用正己烷稀释成适宜浓度的混合标准工作液，于48冰箱中保存，可以使用1周。4.3仪器和设备4.3.1气相色谱质谱仪4.3.2涡动混合器。4.3.3离心机4.3.4分析天平：感量0.0001g4.3.5天平：感量0.01g。4.3.6超声波4.3.7聚丙烯离心管：50mL4.3.8刻度试管：5mL。4.3.9移液器：0.02mL、0.2mL、1.0mL、5.0mL4.4测定步骤4.4.1提取称取(20.05)g试料于50mL离心管中，加pH=11.0的水溶液6mL,涡动混合，待试料完全溶解后，加正己烷20mL,低速振荡5min,超声波提取15min,在6000r/min下离心5min,取出正己烷层，再加入20mL正己烷重复提取一次，超声波提取，离心分离，合并正己烷层，在25旋转蒸发至近干，用5.0mL正己烷复溶，样液用滤膜过滤，供气质联用仪分析。4.4.2标准曲线的制备准确量取适量的双甲脒和2,4-二甲基苯胺标准贮备溶液，用正己烷稀释成双甲脒的浓度为2.0、20.0、100.0、200.0、400.0ng/mL,2,4-二甲基苯胺的浓度为4.0、20.0、100.0、200.0、400.0ng/mL的混合标准工作溶液，供气质联用仪分析。4.4.3测定4.4.3.1色谱条件色谱柱：Rtx-5MS(30m0.25mm0.25m)石英毛细管柱或相当者；载气：氨气，纯度99.999%；柱温：柱起始温度60保持2min,以10/min升至150，再以20min升到280并保持6min;载气流速：l.0mL/min进样量：1L进样方式：不分流进样，1min后开阀；进样口温度：280；接口温度：280：离子源温度：200；检测离子：按保留时间分时段检测，513min监测双甲脒离子293,162,121（定量离子），132；1323min监测2,4-二甲基苯胺离子121（定量离子），120,106,77。农业部781号公告一8一20064.4.3.2气相色谱/质谱定性进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准样品衍生物的离子比相一致，则可判断样品中存在双甲眯或2,4二甲基苯胺。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够的灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。4.4.3.3气相色谱/质谱定量取适量试样溶液和相应的标准工作溶液，作单点或多点校准，以目标离子峰高积分值定量。标准工作液及试样液中的双甲脒和2,4二甲基苯胺响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下，2,4-二甲基苯胺的保留时间约为9.0min,双甲脒的保留时间为20.5min。标准物质总离子流图见附录A中的图A1与A2。4.4.4空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5结果计算和表述按下式(1)计算试样中双甲脒的残留量(g/kg):X=cxAIxU”(1）】A2 m式中：X一试样中双甲脒的残留量，单位为微克每千克(gkg):c一双甲脒标准工作溶液的浓度，单位为纳克每毫升(gmL)；A试样测定液中双甲脒的峰高；A一标准工作溶液中双甲脒的峰高；V一试样溶液定容体积，单位为毫升(mL):试样溶液所代表试样的量，单位为克(g)。按下式(2)计算试样中2,4-二甲基苯胺的残留量(gkg):X=a是(2】式中：X1一试样中2,4二甲基苯胺的残留量(g/kg):c1一2,4-二甲基苯胺标准工作溶液的浓度，单位为纳克每毫升(g/mL):A3一试样测定液中2,4二甲基苯胺的峰高；A4一标准工作溶液中2,4-二甲基苯胺的峰高；V1一试样溶液定容体积，单位为毫升(mL):m1一试样溶液所代表试样的量，单位为克(g)。按下式(3)计算试样中的双甲眯的总残留量(gkg):S=X+1.21XX1(3)式中：S一试样中双甲脒的总残留量，单位为微克每千克(gkg)；X一试样中双甲脒的残留量，单位为微克每千克(gkg):X一试样中2,4二甲基苯胺的残留量，单位为微克每千克(gkg):1.21一双甲脒和2,4-二甲基苯胺之间的转换系数。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。3